加iptg有什么作用
@祁邢6274：IPTG的作用具体是什么 - 作业帮
芮雁17161069697…… [答案] 异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用.
@祁邢6274：IPTG的作用 - 作业帮
芮雁17161069697…… [答案] 蓝白斑筛选时的诱导剂,诱导基因表达β-半乳糖苷酶,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落.
@祁邢6274：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? - 作业帮
芮雁17161069697…… [答案] 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测. 所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@祁邢6274：给细胞加药或者转入基因,发现靶蛋白表达升高, 是因为促进了细胞表达,还是选择性杀死了低表达细胞? -
芮雁17161069697…… 都有可能. 如大肠杆菌表达系统中加抗生素往往是杀死无表达细胞;加iptg是为了促进乳糖启动子后的基因得到表达.
@祁邢6274：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
芮雁17161069697…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@祁邢6274：标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么? -
芮雁17161069697…… 质粒上有两个或两个以上标记基因是为了使用方便.而且两个标记基因的功能是不一样的.比如我们最常用的PUC18/19等,一个是氨苄抗性,另一个是LAC Z基因. 前一个基因的存在,让我们在培养时加入氨苄可以让细菌时刻把这个质粒带着,如果不加氨苄,细菌肯定会把这个质粒丢掉的(毕竟质粒相对于细胞来说是一个包袱,但当氨苄存在时,如果细菌把质粒丢了,细菌便不能抗氨苄而被杀死). 而LAC Z基因是为我们插入目的基因筛选而用的.LAC Z基因本身在IPTG和x-gal的作用下,而产生兰斑.而且这个基因上有很多的酶切位点,方便我们插入自己想要的基因.而我们的基因插入后,把LAC Z基因破坏了,不能产生兰斑.这就是兰白斑筛选.
@祁邢6274：x - gal和iptg的作用是什么? -
芮雁17161069697…… 给你一个地址,自己去看看 http://www.jingke.com.cn/cxxx/amresco.asp
@祁邢6274：在DNA测序前,将目的基因转化入大肠杆菌后,用来培养大肠杆菌的固体培养基中加入的药品是什么及作用? -
芮雁17161069697…… LB培养基 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L酵母提取物(Yeast extract) 5g/L氯化钠(NaCl) 10g/L 琼脂粉15g/L 作用:养细菌 抗生素,Amp+ Kan+什么的 作用:做筛选,质粒上有抗性基因,转入质粒的阳性菌就会在抗生素平板上活下来.现在很少用蓝白斑了,公司的载体都很好,自连的概率在可接受范围了已经.
@祁邢6274：操纵子的作用是什么? -
芮雁17161069697…… 操纵子(operon):指启动基因、终止基因和一系列紧密连锁的结构基因的总称.原核生物大多数基因表达调控是通过操纵子机制实现的.操纵子通常由 2个以上的编码序列与启动序列、操纵序列以及其他调节序列在基因组中成簇串联组成.启...
@祁邢6274：抗体制备小规模测试表达程序 有哪些? -
芮雁17161069697…… 操作规程1 原理:当有乳糖存在时,lac 操纵子(元)即可被诱导.在这个操纵子(元) 体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身.乳糖进入细胞,经 b-半乳糖苷酶催化,转变为半乳糖.后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白,使蛋白构象变化,导...
芮雁17161069697…… [答案] 异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用.
@祁邢6274：IPTG的作用 - 作业帮
芮雁17161069697…… [答案] 蓝白斑筛选时的诱导剂,诱导基因表达β-半乳糖苷酶,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落.
@祁邢6274：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? - 作业帮
芮雁17161069697…… [答案] 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测. 所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@祁邢6274：给细胞加药或者转入基因,发现靶蛋白表达升高, 是因为促进了细胞表达,还是选择性杀死了低表达细胞? -
芮雁17161069697…… 都有可能. 如大肠杆菌表达系统中加抗生素往往是杀死无表达细胞;加iptg是为了促进乳糖启动子后的基因得到表达.
@祁邢6274：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
芮雁17161069697…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@祁邢6274：标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么? -
芮雁17161069697…… 质粒上有两个或两个以上标记基因是为了使用方便.而且两个标记基因的功能是不一样的.比如我们最常用的PUC18/19等,一个是氨苄抗性,另一个是LAC Z基因. 前一个基因的存在,让我们在培养时加入氨苄可以让细菌时刻把这个质粒带着,如果不加氨苄,细菌肯定会把这个质粒丢掉的(毕竟质粒相对于细胞来说是一个包袱,但当氨苄存在时,如果细菌把质粒丢了,细菌便不能抗氨苄而被杀死). 而LAC Z基因是为我们插入目的基因筛选而用的.LAC Z基因本身在IPTG和x-gal的作用下,而产生兰斑.而且这个基因上有很多的酶切位点,方便我们插入自己想要的基因.而我们的基因插入后,把LAC Z基因破坏了,不能产生兰斑.这就是兰白斑筛选.
@祁邢6274：x - gal和iptg的作用是什么? -
芮雁17161069697…… 给你一个地址,自己去看看 http://www.jingke.com.cn/cxxx/amresco.asp
@祁邢6274：在DNA测序前,将目的基因转化入大肠杆菌后,用来培养大肠杆菌的固体培养基中加入的药品是什么及作用? -
芮雁17161069697…… LB培养基 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L酵母提取物(Yeast extract) 5g/L氯化钠(NaCl) 10g/L 琼脂粉15g/L 作用:养细菌 抗生素,Amp+ Kan+什么的 作用:做筛选,质粒上有抗性基因,转入质粒的阳性菌就会在抗生素平板上活下来.现在很少用蓝白斑了,公司的载体都很好,自连的概率在可接受范围了已经.
@祁邢6274：操纵子的作用是什么? -
芮雁17161069697…… 操纵子(operon):指启动基因、终止基因和一系列紧密连锁的结构基因的总称.原核生物大多数基因表达调控是通过操纵子机制实现的.操纵子通常由 2个以上的编码序列与启动序列、操纵序列以及其他调节序列在基因组中成簇串联组成.启...
@祁邢6274：抗体制备小规模测试表达程序 有哪些? -
芮雁17161069697…… 操作规程1 原理:当有乳糖存在时,lac 操纵子(元)即可被诱导.在这个操纵子(元) 体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身.乳糖进入细胞,经 b-半乳糖苷酶催化,转变为半乳糖.后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白,使蛋白构象变化,导...
