iptg加多了
@雍米2104：IPTG加多时表达量怎么减少了 -
熊哄17295381776…… IPTG具有细胞毒性,加多了可能一起细胞死亡,所以表达量会减少
@雍米2104：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
熊哄17295381776…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@雍米2104：蓝白斑筛选加多了氨苄IPTGXGAL会影响?蓝白斑筛选加多了氨苄
熊哄17295381776…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@雍米2104：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
熊哄17295381776…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@雍米2104：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
熊哄17295381776…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@雍米2104：培养荚膜红细菌时,在1L培养基中加入1mM IPTG诱导,30°,放置摇床,218rpm,6小时后发现培养基越摇越清,why
熊哄17295381776…… 没有做过荚膜红细胞,但是知道IPTG对细胞有一定毒性,使细胞几乎不怎么复制,而是表达产生大量蛋白,所以培养基里的细菌数量不会怎么增加,但是会不会变清不太清楚,可能是判断上的误差.
@雍米2104：为什么在做原核表达SDS - PAGE时对照的还要做个加诱导剂的呢,那诱导剂加多少才好呢, -
熊哄17295381776…… 因为你做的并不是纯化的蛋白电泳,而是菌体的总蛋白,如果不作对照的话,就不能说明哪个条带是你的目的基因的特异表达. 如果做目的基因不加诱导剂的对照的话,可以看出目的基因在不诱导下的本底表达水平.也可以看出诱导剂的作用. 我们实验室就是那么做的,有时候还会加空菌(宿主菌)的对照.
@雍米2104：X - gal和IPTG,什么时候加到培养基里好 -
熊哄17295381776…… 一般是配好的amp+LB板,涂板的时候把x-gal 40ul(20mg/ml),IPTG 4ul(200mg/ml)加入到菌液里,然后混匀涂板.也可以先涂到板上在涂菌. 配培养基的时候,一般不直接加x-gal,IPTG,确实存在浪费问题,因为菌只在平板表面长.
@雍米2104：roseta菌株诱导表达,加入IPTG后发生菌溶现象,菌液变粘稠清亮,没有表达蛋白 -
熊哄17295381776…… 可能是你的菌污染了,加入IPTG后菌会发生变化比原来的要清一点,但不会粘稠.你可以换用BL21(DE3 )试一下.只要你的蛋白含有的稀有密码子不是很多,BL21 的效果是相同的.
@雍米2104：现有1M IPTG,加到5ml培养基中,使终浓度为1mmol/L ,加多少?怎么算的?不要讲述,要公式计算 - 作业帮
熊哄17295381776…… [答案] 加0.005ml.公式:1M*0.005ml/5ml=1mmol/L
熊哄17295381776…… IPTG具有细胞毒性,加多了可能一起细胞死亡,所以表达量会减少
@雍米2104：诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗? -
熊哄17295381776…… 如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加IPTG的话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的表达量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
@雍米2104：蓝白斑筛选加多了氨苄IPTGXGAL会影响?蓝白斑筛选加多了氨苄
熊哄17295381776…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@雍米2104：扩培时直接加入了IPTG 会怎么样 -
熊哄17295381776…… 也可以诱导出蛋白,本人曾经在实验中也遇到过类似情况. IPTG之所以在诱导阶段加入,目的在于尽量减少大量表达蛋白(通常需要表达的蛋白也是工程菌所不需要的)对菌体生长的影响,便于较早达到所需菌体浓度,利于诱导阶段大量表达蛋白.题主提到的这个问题,一般来说可能会对菌体的生长速度产生影响,某些较敏感的蛋白有可能会形成包涵体,或是浓度有所变化,但是表达出蛋白应该是没问题的. 不过建议提蛋白时候最好检测一下,如果浓度或是可溶性不合要求尽早弃掉,重新诱导以免影响实验.
@雍米2104：诱导式IPTG的浓度应该好多?要试验确定吗 -
熊哄17295381776…… 一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度. 二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导. 三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋...
@雍米2104：培养荚膜红细菌时,在1L培养基中加入1mM IPTG诱导,30°,放置摇床,218rpm,6小时后发现培养基越摇越清,why
熊哄17295381776…… 没有做过荚膜红细胞,但是知道IPTG对细胞有一定毒性,使细胞几乎不怎么复制,而是表达产生大量蛋白,所以培养基里的细菌数量不会怎么增加,但是会不会变清不太清楚,可能是判断上的误差.
@雍米2104：为什么在做原核表达SDS - PAGE时对照的还要做个加诱导剂的呢,那诱导剂加多少才好呢, -
熊哄17295381776…… 因为你做的并不是纯化的蛋白电泳,而是菌体的总蛋白,如果不作对照的话,就不能说明哪个条带是你的目的基因的特异表达. 如果做目的基因不加诱导剂的对照的话,可以看出目的基因在不诱导下的本底表达水平.也可以看出诱导剂的作用. 我们实验室就是那么做的,有时候还会加空菌(宿主菌)的对照.
@雍米2104：X - gal和IPTG,什么时候加到培养基里好 -
熊哄17295381776…… 一般是配好的amp+LB板,涂板的时候把x-gal 40ul(20mg/ml),IPTG 4ul(200mg/ml)加入到菌液里,然后混匀涂板.也可以先涂到板上在涂菌. 配培养基的时候,一般不直接加x-gal,IPTG,确实存在浪费问题,因为菌只在平板表面长.
@雍米2104：roseta菌株诱导表达,加入IPTG后发生菌溶现象,菌液变粘稠清亮,没有表达蛋白 -
熊哄17295381776…… 可能是你的菌污染了,加入IPTG后菌会发生变化比原来的要清一点,但不会粘稠.你可以换用BL21(DE3 )试一下.只要你的蛋白含有的稀有密码子不是很多,BL21 的效果是相同的.
@雍米2104：现有1M IPTG,加到5ml培养基中,使终浓度为1mmol/L ,加多少?怎么算的?不要讲述,要公式计算 - 作业帮
熊哄17295381776…… [答案] 加0.005ml.公式:1M*0.005ml/5ml=1mmol/L
