空质粒蓝白斑筛选
@政屈614：蓝白斑筛选 -
唐爽17626149747…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@政屈614：质粒dna的转化实验结果培养基上出现大量蓝斑和白斑分别是什么?为什么有这么多蓝斑? - 作业帮
唐爽17626149747…… [答案] 你用的是蓝白斑筛选,白斑为插入目的基因片段的转化子,蓝斑则没有,挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证.百度蓝白斑筛选.
@政屈614：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
唐爽17626149747…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
@政屈614：什么是选择性培养基?什么是鉴别性培养基?二者有何区别和联系?试举一例并分析其原理? -
唐爽17626149747…… 选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基.其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌,从而提高该菌的筛选效率.如以纤维素作唯一碳源的培养基可分散到分解纤维素的微生物.分散酵母菌和霉菌时,可添加适量的青霉素、四环素或链霉素,以抑制细菌和放线菌的生长. 鉴别性培养基是在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基,此类培养基一般用于鉴定不同微生物.如EMB即伊红美蓝乳糖造就基.大肠杆菌分解乳糖孕育发生大量混淆酸,可染上酸性伊红,伊红又和美蓝结合,菌落被染成深紫色,从菌落外貌的发射光中还可以看到绿色金属发光.
@政屈614：关于蓝白斑筛选的遇到的问题 -
唐爽17626149747…… 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@政屈614：α互补筛选后,很多白斑,为什么说不好? -
唐爽17626149747…… 没这个说法.α互补是白斑多说明重组子多.在实际应用过程中,要求白色菌落占到90%以上.蓝色菌落过多说明载体自连严重.
@政屈614：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
唐爽17626149747…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
@政屈614：长出的白斑一定是转基因的吗蓝白斑 -
唐爽17626149747…… ...你是在说蓝白斑筛选吧~ 培养基中本身就有抗生素,转了质粒(含抗性基因)的细菌才能在培养基上长出来.而外源基因是插入在lacZ的α片段基因里面,所以插入了外源片段的质粒导入细菌后,细菌不能表达β半乳糖苷酶,所以菌落是白色;而转入空载体的菌落呈蓝色(培养基中的X-gel在β半乳糖苷酶作用下显蓝色).
@政屈614：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
唐爽17626149747…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
唐爽17626149747…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@政屈614：质粒dna的转化实验结果培养基上出现大量蓝斑和白斑分别是什么?为什么有这么多蓝斑? - 作业帮
唐爽17626149747…… [答案] 你用的是蓝白斑筛选,白斑为插入目的基因片段的转化子,蓝斑则没有,挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证.百度蓝白斑筛选.
@政屈614：有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤,原理.谢谢. 有加分 -
唐爽17626149747…… 在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 (1)首先定义 LacZ:B(beta,打不出来,下同)-半乳糖苷酶 LacZ':含有B-半乳糖苷酶的启动子和5'端的编码的a肽链. 那么LacZ'是没有功能的(是指能表达没有功能的蛋白质),只有和失去正常氨基...
@政屈614：什么是选择性培养基?什么是鉴别性培养基?二者有何区别和联系?试举一例并分析其原理? -
唐爽17626149747…… 选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基.其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌,从而提高该菌的筛选效率.如以纤维素作唯一碳源的培养基可分散到分解纤维素的微生物.分散酵母菌和霉菌时,可添加适量的青霉素、四环素或链霉素,以抑制细菌和放线菌的生长. 鉴别性培养基是在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基,此类培养基一般用于鉴定不同微生物.如EMB即伊红美蓝乳糖造就基.大肠杆菌分解乳糖孕育发生大量混淆酸,可染上酸性伊红,伊红又和美蓝结合,菌落被染成深紫色,从菌落外貌的发射光中还可以看到绿色金属发光.
@政屈614：关于蓝白斑筛选的遇到的问题 -
唐爽17626149747…… 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@政屈614：α互补筛选后,很多白斑,为什么说不好? -
唐爽17626149747…… 没这个说法.α互补是白斑多说明重组子多.在实际应用过程中,要求白色菌落占到90%以上.蓝色菌落过多说明载体自连严重.
@政屈614：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
唐爽17626149747…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
@政屈614：长出的白斑一定是转基因的吗蓝白斑 -
唐爽17626149747…… ...你是在说蓝白斑筛选吧~ 培养基中本身就有抗生素,转了质粒(含抗性基因)的细菌才能在培养基上长出来.而外源基因是插入在lacZ的α片段基因里面,所以插入了外源片段的质粒导入细菌后,细菌不能表达β半乳糖苷酶,所以菌落是白色;而转入空载体的菌落呈蓝色(培养基中的X-gel在β半乳糖苷酶作用下显蓝色).
@政屈614：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
唐爽17626149747…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
