actin内参抗体的二抗
@轩贵6728：western blot内参抗体actin为什么出了好几条带 -
计玛18147627502…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@轩贵6728：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
计玛18147627502…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
@轩贵6728：western blot的抗体怎么选择? -
计玛18147627502…… 做原核表达蛋白western一个要注意的问题就是上样的蛋白不能太大,最好在100ng以下.以防止因为蛋白量太大引起非特异性信号.
@轩贵6728：求助选择什么作为内参 -
计玛18147627502…… 搞不太清楚你想说什么.内参抗体一般选择 β-actin,GAPDH.hsp90也OK.一般内参抗体都是鼠源的埃既然一抗是鼠源,二抗是接HRP的羊抗鼠就很好理解埃
@轩贵6728：western blot 的内参不一致,急求助 -
计玛18147627502…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@轩贵6728：Western Blot都可以用beta - actin做内参吗? -
计玛18147627502…… 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin 做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用: 1、如果目的蛋白检测不...
@轩贵6728：请教如何选择western的抗体 -
计玛18147627502…… 抗体选择一般注意几点:1、特异性(特异性高较好,一般单抗优于多抗,但有时你想贴出同一蛋白不同加工形态,多抗能贴出所有带,根据实验选择)2、效价(效价高)3、知名抗体公司,如CST、abcam、Thermo等
@轩贵6728：关于WESTERN BLOT的内参 -
计玛18147627502…… 肯定要加二抗啊,内参和你的目的蛋白是一样的,也是一个蛋白,只不过表达比你的目的蛋白在各个组织之间恒定许多,它是你的目的蛋白的一个参照,但是它的作用和mark还不一样,所以内参是一定要要的,否则,人家会质疑你实验的可信性. 如果你的实验动物是大鼠,打个比方一抗是兔抗鼠吧或者其他的什么抗鼠的,二抗就是什么抗兔的,比如说羊抗兔之类,一抗最好买国外的,二抗国内的就可以了
@轩贵6728：WB杂出来的actin为什么两条带 -
计玛18147627502…… 出现两条带是非常正常的现象. 抗体的原因:不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异,大部分都能检测到目的条带,但是有时能检测到非特异性的条带; 蛋白亚型表达的原因:我做了大概两年半的WB,经常会发现,一种蛋白有时检测压型很...
@轩贵6728：我的两个目的蛋白与actin都挨的很近,为什么在膜上孵两个目的蛋白的一抗却总是曝出actin条带 -
计玛18147627502…… 肌动蛋白我的理解是用来验证蛋白表达的,相当于对照的意思 如果肌动蛋白有显色,目的蛋白未显色,那就是目的蛋白未表达 另,难道一抗之后就去曝光了吗?不需要二抗吗?有不对的地方可以讨论指正~
计玛18147627502…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@轩贵6728：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
计玛18147627502…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
@轩贵6728：western blot的抗体怎么选择? -
计玛18147627502…… 做原核表达蛋白western一个要注意的问题就是上样的蛋白不能太大,最好在100ng以下.以防止因为蛋白量太大引起非特异性信号.
@轩贵6728：求助选择什么作为内参 -
计玛18147627502…… 搞不太清楚你想说什么.内参抗体一般选择 β-actin,GAPDH.hsp90也OK.一般内参抗体都是鼠源的埃既然一抗是鼠源,二抗是接HRP的羊抗鼠就很好理解埃
@轩贵6728：western blot 的内参不一致,急求助 -
计玛18147627502…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@轩贵6728：Western Blot都可以用beta - actin做内参吗? -
计玛18147627502…… 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin 做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用: 1、如果目的蛋白检测不...
@轩贵6728：请教如何选择western的抗体 -
计玛18147627502…… 抗体选择一般注意几点:1、特异性(特异性高较好,一般单抗优于多抗,但有时你想贴出同一蛋白不同加工形态,多抗能贴出所有带,根据实验选择)2、效价(效价高)3、知名抗体公司,如CST、abcam、Thermo等
@轩贵6728：关于WESTERN BLOT的内参 -
计玛18147627502…… 肯定要加二抗啊,内参和你的目的蛋白是一样的,也是一个蛋白,只不过表达比你的目的蛋白在各个组织之间恒定许多,它是你的目的蛋白的一个参照,但是它的作用和mark还不一样,所以内参是一定要要的,否则,人家会质疑你实验的可信性. 如果你的实验动物是大鼠,打个比方一抗是兔抗鼠吧或者其他的什么抗鼠的,二抗就是什么抗兔的,比如说羊抗兔之类,一抗最好买国外的,二抗国内的就可以了
@轩贵6728：WB杂出来的actin为什么两条带 -
计玛18147627502…… 出现两条带是非常正常的现象. 抗体的原因:不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异,大部分都能检测到目的条带,但是有时能检测到非特异性的条带; 蛋白亚型表达的原因:我做了大概两年半的WB,经常会发现,一种蛋白有时检测压型很...
@轩贵6728：我的两个目的蛋白与actin都挨的很近,为什么在膜上孵两个目的蛋白的一抗却总是曝出actin条带 -
计玛18147627502…… 肌动蛋白我的理解是用来验证蛋白表达的,相当于对照的意思 如果肌动蛋白有显色,目的蛋白未显色,那就是目的蛋白未表达 另,难道一抗之后就去曝光了吗?不需要二抗吗?有不对的地方可以讨论指正~
