gapdh内参蛋白分子量wb
@耿晏4525：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
蔡阙18178202304…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@耿晏4525：WB试验之如何选择内参抗体 -
蔡阙18178202304…… 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~
@耿晏4525：核蛋白,胞浆蛋白,膜蛋白做WB 用什么做内参抗体 -
蔡阙18178202304…… actin GAPDH 万能内参 主要看你的目标蛋白的分子量多大,“目标蛋白要与内参蛋白的分子量差异大!” 方便检测 核蛋白,有很多种,分子量不同 膜蛋白,有很多很多种,分子量不同 浆蛋白,有成千上万种,分子量不同. 具体实验,具体目的蛋白,具体的内参.
@耿晏4525：Western blot 内参跑不齐怎么调整 -
蔡阙18178202304…… 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...
@耿晏4525：GADPH是什么 -
蔡阙18178202304…… GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
@耿晏4525：在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 -
蔡阙18178202304…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@耿晏4525：α - 珠蛋白可以做内参吗 -
蔡阙18178202304…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD.1、如果是提取的总蛋白,然后2113做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公5261认的东西.2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜4102蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理1653细胞,比较处理前后某种膜蛋专白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混属杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@耿晏4525：做WB时GAPDH可以用作核蛋白内参吗 -
蔡阙18178202304…… 可以
@耿晏4525：wb 中内参齐为什么蛋白就一致 -
蔡阙18178202304…… = 胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊……用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…… 做胞浆蛋白的话,wb的内参一般为β-actin或者gapdh,主要还是要看你的细胞表达哪一个.
@耿晏4525：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
蔡阙18178202304…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
蔡阙18178202304…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@耿晏4525：WB试验之如何选择内参抗体 -
蔡阙18178202304…… 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~
@耿晏4525：核蛋白,胞浆蛋白,膜蛋白做WB 用什么做内参抗体 -
蔡阙18178202304…… actin GAPDH 万能内参 主要看你的目标蛋白的分子量多大,“目标蛋白要与内参蛋白的分子量差异大!” 方便检测 核蛋白,有很多种,分子量不同 膜蛋白,有很多很多种,分子量不同 浆蛋白,有成千上万种,分子量不同. 具体实验,具体目的蛋白,具体的内参.
@耿晏4525：Western blot 内参跑不齐怎么调整 -
蔡阙18178202304…… 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...
@耿晏4525：GADPH是什么 -
蔡阙18178202304…… GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
@耿晏4525：在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 -
蔡阙18178202304…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@耿晏4525：α - 珠蛋白可以做内参吗 -
蔡阙18178202304…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD.1、如果是提取的总蛋白,然后2113做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公5261认的东西.2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜4102蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理1653细胞,比较处理前后某种膜蛋专白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混属杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@耿晏4525：做WB时GAPDH可以用作核蛋白内参吗 -
蔡阙18178202304…… 可以
@耿晏4525：wb 中内参齐为什么蛋白就一致 -
蔡阙18178202304…… = 胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊……用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…… 做胞浆蛋白的话,wb的内参一般为β-actin或者gapdh,主要还是要看你的细胞表达哪一个.
@耿晏4525：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
蔡阙18178202304…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
