gapdh在wb表达什么
@支琰3664：WB试验之如何选择内参抗体 -
禹药17344301747…… 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~
@支琰3664：在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 -
禹药17344301747…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@支琰3664：wb 中内参齐为什么蛋白就一致 -
禹药17344301747…… = 胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊……用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…… 做胞浆蛋白的话,wb的内参一般为β-actin或者gapdh,主要还是要看你的细胞表达哪一个.
@支琰3664：Western blot 内参跑不齐怎么调整 -
禹药17344301747…… 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...
@支琰3664：GADPH是什么 -
禹药17344301747…… GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
@支琰3664：做wb的bax和bcl - 2的目的蛋白时会出现时间长的细胞凋亡而导致内参出不来吗 -
禹药17344301747…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD. 1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西. 2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@支琰3664：做WB时GAPDH可以用作核蛋白内参吗 -
禹药17344301747…… 可以
@支琰3664：抗体可以同时做wb,免疫组化,免疫荧光吗 -
禹药17344301747…… 可以的,具体看抗体说明书的Application描述,同时包含这三种应用的就可以.举例厚百上的一个GAPDH抗体,它的应用就同时满足(Application:WB IHC IF),可百度搜 厚百 进去网站看看.厚百提供试剂、耗材、仪器等实验室用品及实验室技术服务,科研整体服务.
@支琰3664：Western Blot为什么必须要用内参 -
禹药17344301747…… 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
禹药17344301747…… 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~
@支琰3664：在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 -
禹药17344301747…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@支琰3664：wb 中内参齐为什么蛋白就一致 -
禹药17344301747…… = 胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊……用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…… 做胞浆蛋白的话,wb的内参一般为β-actin或者gapdh,主要还是要看你的细胞表达哪一个.
@支琰3664：Western blot 内参跑不齐怎么调整 -
禹药17344301747…… 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...
@支琰3664：GADPH是什么 -
禹药17344301747…… GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
@支琰3664：做wb的bax和bcl - 2的目的蛋白时会出现时间长的细胞凋亡而导致内参出不来吗 -
禹药17344301747…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD. 1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西. 2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@支琰3664：做WB时GAPDH可以用作核蛋白内参吗 -
禹药17344301747…… 可以
@支琰3664：抗体可以同时做wb,免疫组化,免疫荧光吗 -
禹药17344301747…… 可以的,具体看抗体说明书的Application描述,同时包含这三种应用的就可以.举例厚百上的一个GAPDH抗体,它的应用就同时满足(Application:WB IHC IF),可百度搜 厚百 进去网站看看.厚百提供试剂、耗材、仪器等实验室用品及实验室技术服务,科研整体服务.
@支琰3664：Western Blot为什么必须要用内参 -
禹药17344301747…… 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
