gapdh在wb中的作用
@哈咽5180：做WB时GAPDH可以用作核蛋白内参吗 -
芮琳17853752575…… 可以
@哈咽5180：western blot 的内参不一致,急求助 -
芮琳17853752575…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@哈咽5180：wb 中内参齐为什么蛋白就一致 -
芮琳17853752575…… = 胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊……用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…… 做胞浆蛋白的话,wb的内参一般为β-actin或者gapdh,主要还是要看你的细胞表达哪一个.
@哈咽5180：哪位知道GAPDH内参有什么优点? -
芮琳17853752575…… ◆Real-time PCR技术的原理就是用一种标准对照能够估计出一种特异性靶DNA或RNA分子的相对含量. ◆这种标准对照就是参照物,在定量PCR中,用它来作为扩增系统的阳性对照,并作为未知样品定量的标准,同时通过竞争性作用校正扩增...
@哈咽5180：做wb的bax和bcl - 2的目的蛋白时会出现时间长的细胞凋亡而导致内参出不来吗 -
芮琳17853752575…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD. 1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西. 2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@哈咽5180：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
芮琳17853752575…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@哈咽5180：Western Blot为什么必须要用内参 -
芮琳17853752575…… 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
@哈咽5180：Western blot 内参跑不齐怎么调整 -
芮琳17853752575…… 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...
@哈咽5180：WB试验之如何选择内参抗体 -
芮琳17853752575…… 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~
@哈咽5180：在DNA质粒提取实验中各种试剂的作用buffer P1 、buffer P2、bufferP3、buffer WA、buffer WB、TE 各自的作用... - 作业帮
芮琳17853752575…… [答案] 以东盛生物的为例 buffer P1:除去RNA buffer P2:裂解细胞 buffer P3:沉淀DNA buffer WA、buffer WB:都是洗涤液(这两个之间有什么区别我也不清楚) TE:溶解DNA.
芮琳17853752575…… 可以
@哈咽5180：western blot 的内参不一致,急求助 -
芮琳17853752575…… 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
@哈咽5180：wb 中内参齐为什么蛋白就一致 -
芮琳17853752575…… = 胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊……用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…… 做胞浆蛋白的话,wb的内参一般为β-actin或者gapdh,主要还是要看你的细胞表达哪一个.
@哈咽5180：哪位知道GAPDH内参有什么优点? -
芮琳17853752575…… ◆Real-time PCR技术的原理就是用一种标准对照能够估计出一种特异性靶DNA或RNA分子的相对含量. ◆这种标准对照就是参照物,在定量PCR中,用它来作为扩增系统的阳性对照,并作为未知样品定量的标准,同时通过竞争性作用校正扩增...
@哈咽5180：做wb的bax和bcl - 2的目的蛋白时会出现时间长的细胞凋亡而导致内参出不来吗 -
芮琳17853752575…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD. 1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西. 2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@哈咽5180：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
芮琳17853752575…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@哈咽5180：Western Blot为什么必须要用内参 -
芮琳17853752575…… 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
@哈咽5180：Western blot 内参跑不齐怎么调整 -
芮琳17853752575…… 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...
@哈咽5180：WB试验之如何选择内参抗体 -
芮琳17853752575…… 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~
@哈咽5180：在DNA质粒提取实验中各种试剂的作用buffer P1 、buffer P2、bufferP3、buffer WA、buffer WB、TE 各自的作用... - 作业帮
芮琳17853752575…… [答案] 以东盛生物的为例 buffer P1:除去RNA buffer P2:裂解细胞 buffer P3:沉淀DNA buffer WA、buffer WB:都是洗涤液(这两个之间有什么区别我也不清楚) TE:溶解DNA.
