gapdh基因有多少bp
@石世1857：pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任... - 作业帮
胡露19652529898…… [答案] 首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marker基因,但是你现在g...
@石世1857：RT - PCR 结果,请教问题可能出在哪一部分.谢谢
胡露19652529898…… 你提取的四个RNA中,除了2号浓度很低之外,另外三个肯定符合做RT-PCR的要求了,CDNA也是,浓度是够的. 而电泳图中PCR产物的1234都是引物二聚体,没有出现你的目的基因 所以我的判断是:问题出在PCR这一过程.有可能是引物设...
@石世1857：做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? -
胡露19652529898…… 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
@石世1857：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
胡露19652529898…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@石世1857：DNA基因库里面的kb,GB,说基因有多少G是什么意思?? -
胡露19652529898…… 首先需要搞清楚什么是bp,1bp就是一个碱基,1kb=1000bp,基因也用kb,mb,gb表示,不过换算是1000.
@石世1857：为什么pcr扩出了我要的基因,但是胶回收的条带却下移了500bp -
胡露19652529898…… 为什么pcr扩出了我要的基因,但是胶回收的条带却下移了500bp 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.一个解释,目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.如果挑的菌落都是500bp的话,那就是你pcr跑胶回收的时候切错条带了,或者你的目的片段中有你选择的限制内切酶的酶切位点,被切断了.
@石世1857：关于pcr引物设计:我做反转录pcr,目的基因是大鼠ACE2和ACE.
胡露19652529898…… 首先,要看你的目的.如果你只是做鉴定,或者做reverse real-time PCR定量,那么扩增的片段最好是100-300bp,显然这不是全长的.而该片段的要求是要保守.2、看来你是新手,我的建议是在pubmed上查文献,肯定有人用过,关键词是...
@石世1857：这是我设计的罗非鱼GAPDH基因的引物,各位高手看看有没有什么问题啊?最近我跑RT - PCR老失败! -
胡露19652529898…… 做RT首先确定RNA没有问题,这是前提;然后你这对引物,即使是直接扩增DNA也比较困难,给你俩建议,第一,尽量把突变的碱基放在最5端的位置,你的下游引物突变点有点靠近中间了,不是特别好;第二,把你的引物加长一些或者是设置在GC含量相对高一点的位置以使其退火温度高于60度,这样只要你的RNA没有问题就一定做得出来.你要想用现在的这对引物可以,建议你换好的酶,不然不好做.PP并不是设计引物好的软件,但不知道为什么国内都用它,其实它很业余.
@石世1857：看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 -
胡露19652529898…… 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.
@石世1857：实时荧光pcr技术检查唐氏综合症为什么要设置管家基因?设置管家基因对照的具体原理是什么? -
胡露19652529898…… 由于正常人21号染色体上的单拷贝基因剂与其他常染色体上的单拷贝基因剂量相同,而唐氏综合症患者则是1.5倍 通过检测21号染色体单拷贝基因与常染色体单拷贝基因GAPDH(管家基因)的相对拷贝数的比值来判断21号染色体的倍性以判断唐氏综合症,
胡露19652529898…… [答案] 首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marker基因,但是你现在g...
@石世1857：RT - PCR 结果,请教问题可能出在哪一部分.谢谢
胡露19652529898…… 你提取的四个RNA中,除了2号浓度很低之外,另外三个肯定符合做RT-PCR的要求了,CDNA也是,浓度是够的. 而电泳图中PCR产物的1234都是引物二聚体,没有出现你的目的基因 所以我的判断是:问题出在PCR这一过程.有可能是引物设...
@石世1857：做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? -
胡露19652529898…… 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
@石世1857：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
胡露19652529898…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@石世1857：DNA基因库里面的kb,GB,说基因有多少G是什么意思?? -
胡露19652529898…… 首先需要搞清楚什么是bp,1bp就是一个碱基,1kb=1000bp,基因也用kb,mb,gb表示,不过换算是1000.
@石世1857：为什么pcr扩出了我要的基因,但是胶回收的条带却下移了500bp -
胡露19652529898…… 为什么pcr扩出了我要的基因,但是胶回收的条带却下移了500bp 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.一个解释,目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.如果挑的菌落都是500bp的话,那就是你pcr跑胶回收的时候切错条带了,或者你的目的片段中有你选择的限制内切酶的酶切位点,被切断了.
@石世1857：关于pcr引物设计:我做反转录pcr,目的基因是大鼠ACE2和ACE.
胡露19652529898…… 首先,要看你的目的.如果你只是做鉴定,或者做reverse real-time PCR定量,那么扩增的片段最好是100-300bp,显然这不是全长的.而该片段的要求是要保守.2、看来你是新手,我的建议是在pubmed上查文献,肯定有人用过,关键词是...
@石世1857：这是我设计的罗非鱼GAPDH基因的引物,各位高手看看有没有什么问题啊?最近我跑RT - PCR老失败! -
胡露19652529898…… 做RT首先确定RNA没有问题,这是前提;然后你这对引物,即使是直接扩增DNA也比较困难,给你俩建议,第一,尽量把突变的碱基放在最5端的位置,你的下游引物突变点有点靠近中间了,不是特别好;第二,把你的引物加长一些或者是设置在GC含量相对高一点的位置以使其退火温度高于60度,这样只要你的RNA没有问题就一定做得出来.你要想用现在的这对引物可以,建议你换好的酶,不然不好做.PP并不是设计引物好的软件,但不知道为什么国内都用它,其实它很业余.
@石世1857：看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 -
胡露19652529898…… 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.
@石世1857：实时荧光pcr技术检查唐氏综合症为什么要设置管家基因?设置管家基因对照的具体原理是什么? -
胡露19652529898…… 由于正常人21号染色体上的单拷贝基因剂与其他常染色体上的单拷贝基因剂量相同,而唐氏综合症患者则是1.5倍 通过检测21号染色体单拷贝基因与常染色体单拷贝基因GAPDH(管家基因)的相对拷贝数的比值来判断21号染色体的倍性以判断唐氏综合症,
