il18蛋白分子量wb
@钦乔3196：怎样计算电泳中蛋白分子量 -
扈韵15398692129…… 1.首先要选择一款未经过染色的蛋白Marker,和你所要确定分子量大小的蛋白一起电泳. 2.在电泳过程中尽量选择靠中间的泳道,避免边缘效应引起条带歪斜,没有样的孔用loading填满. 3.电泳结束后,考马斯亮蓝染色. 4.如果有凝胶成像系统,可以直接先拍照,然后用系统带的软件,根据Marker每一个条带的位置,分析目标蛋白分子量. 5.如果没有这种系统,就只能用土一点的办法,量每一个Marker条带相对于加样孔的迁移量,对应每个条带的分子量做标准曲线(excel可以),通过标准曲线得到的方程和目标蛋白的迁移率计算目标蛋白的分子量大小就可以了.
@钦乔3196：目标蛋白分子量接近,可以不用跑两次western blot吗 -
扈韵15398692129…… western blot检测的结果与理论计算值有差异是非常正常的事情 western blot检测最重要的意义在于目的蛋白在某细胞或组织中表达情况的定性.而目的蛋白检测的大小取决于目的蛋白在sds-page的结果,也就是说如果目的蛋白在sds-page上检测结果是偏大的,那么在western blot转膜后也会是偏大的,这和目的蛋白的结构(糖基化修饰),,组成等等都有关系.所以只是一个相对的分子量的结果. 要精确检测目的蛋白的分子量结果需要做()检测
@钦乔3196：分子量为6kd的蛋白质怎样做wb -
扈韵15398692129…… 建议用tris-acetate gel+tris-tricine running buffer,这个系统很适合做大分子蛋白的western blot.电泳时间要很长,2个小时?转膜时间也要长点 下面这个是胶的浓度范围 蛋白质分子量范围 适用的凝胶浓度(%)1-4*10`4 15-204*104-1*10`5 10-151-5*10`5 5-10>5*10`5 2-5
@钦乔3196：WB蛋白提取 -
扈韵15398692129…… 这个应该不是Western blot的问题,应该是SDS-PAGE没有跑好造成的. 最后两个样品可能和SDS的结合不够彻底. 建议做Western的时候,同一批次样品SDS-PAGE跑两块胶,一块胶用来转膜印染,另一块胶用来考染作为对照.这样比较容易分析出Western的异常.
@钦乔3196：蛋白质分子质量怎么算 -
扈韵15398692129…… 这边提到的氨基酸的平均分子质量,应该是包括残基的质量(-NH3和-COOH),因此要扣去形成肽键过程中脱去水(18)的质量,所以应该这么计算: (3384/18)+2为氨基酸个数,头尾两个氨基酸是带游离残基,因为是2条肽链,所以加2 ((3384/18)+2)*130为该蛋白的分子量
@钦乔3196：蛋白质相对分子量计算公式 -
扈韵15398692129…… 蛋白质的分子量的计算 蛋白质相对分子质量=氨基酸相对分子质量总和—失去水分子的相对分子质量总和 蛋白质中肽键数的计算 肽键数(或脱去的水分子数)=氨基酸数—肽链数
@钦乔3196：蛋白质分子量的计算.
扈韵15398692129…… 蛋白质分子量的计算方法:氨基酸的平均分子量X氨基酸总的分子数(肽链数+肽键数)-18X脱水缩合的水分子数(和肽键数相等) 所以,你的答案是:128X(2+98)-18X98=11036
@钦乔3196：蛋白的分子量是多大的时候是大蛋白 -
扈韵15398692129…… 300KD左右的都叫大蛋白,如果做WB实验的不容易做成功,而且marker不好买,不过如果做WB实验建议你送南京奥青生物公司去做,服务还不错,自己也省的烦.
@钦乔3196：蛋白质的分子量的计算题 -
扈韵15398692129…… 这题眼熟. b个碱基【对】的基因能转录出含b【个】碱基的mRNA. b【个】碱基的mRNA中最多含b/3个密码子. b/3个密码子最多可以翻译出b/3个氨基酸(高中阶段一般不考虑终止密码子). b/3个氨基酸形成n条肽链. 那么形成的肽键数是(b/3-n). 形成一个肽键脱去一分子的水,则脱水(b/3-n)个. 水的相对分子质量是18. 所以这个蛋白质的分子量是,所有氨基酸分子量之和减去形成肽链时脱去的水的分子量之和. 式子是:a*(b/3)-(b/3-n)*18,再整理一下就可以了.
@钦乔3196：求WB高手解惑:我的蛋白分子量91KD,该用多少浓度的胶,上样量多少啊? -
扈韵15398692129…… 10%的分离胶,上样量一般10微升-15微升
扈韵15398692129…… 1.首先要选择一款未经过染色的蛋白Marker,和你所要确定分子量大小的蛋白一起电泳. 2.在电泳过程中尽量选择靠中间的泳道,避免边缘效应引起条带歪斜,没有样的孔用loading填满. 3.电泳结束后,考马斯亮蓝染色. 4.如果有凝胶成像系统,可以直接先拍照,然后用系统带的软件,根据Marker每一个条带的位置,分析目标蛋白分子量. 5.如果没有这种系统,就只能用土一点的办法,量每一个Marker条带相对于加样孔的迁移量,对应每个条带的分子量做标准曲线(excel可以),通过标准曲线得到的方程和目标蛋白的迁移率计算目标蛋白的分子量大小就可以了.
@钦乔3196：目标蛋白分子量接近,可以不用跑两次western blot吗 -
扈韵15398692129…… western blot检测的结果与理论计算值有差异是非常正常的事情 western blot检测最重要的意义在于目的蛋白在某细胞或组织中表达情况的定性.而目的蛋白检测的大小取决于目的蛋白在sds-page的结果,也就是说如果目的蛋白在sds-page上检测结果是偏大的,那么在western blot转膜后也会是偏大的,这和目的蛋白的结构(糖基化修饰),,组成等等都有关系.所以只是一个相对的分子量的结果. 要精确检测目的蛋白的分子量结果需要做()检测
@钦乔3196：分子量为6kd的蛋白质怎样做wb -
扈韵15398692129…… 建议用tris-acetate gel+tris-tricine running buffer,这个系统很适合做大分子蛋白的western blot.电泳时间要很长,2个小时?转膜时间也要长点 下面这个是胶的浓度范围 蛋白质分子量范围 适用的凝胶浓度(%)1-4*10`4 15-204*104-1*10`5 10-151-5*10`5 5-10>5*10`5 2-5
@钦乔3196：WB蛋白提取 -
扈韵15398692129…… 这个应该不是Western blot的问题,应该是SDS-PAGE没有跑好造成的. 最后两个样品可能和SDS的结合不够彻底. 建议做Western的时候,同一批次样品SDS-PAGE跑两块胶,一块胶用来转膜印染,另一块胶用来考染作为对照.这样比较容易分析出Western的异常.
@钦乔3196：蛋白质分子质量怎么算 -
扈韵15398692129…… 这边提到的氨基酸的平均分子质量,应该是包括残基的质量(-NH3和-COOH),因此要扣去形成肽键过程中脱去水(18)的质量,所以应该这么计算: (3384/18)+2为氨基酸个数,头尾两个氨基酸是带游离残基,因为是2条肽链,所以加2 ((3384/18)+2)*130为该蛋白的分子量
@钦乔3196：蛋白质相对分子量计算公式 -
扈韵15398692129…… 蛋白质的分子量的计算 蛋白质相对分子质量=氨基酸相对分子质量总和—失去水分子的相对分子质量总和 蛋白质中肽键数的计算 肽键数(或脱去的水分子数)=氨基酸数—肽链数
@钦乔3196：蛋白质分子量的计算.
扈韵15398692129…… 蛋白质分子量的计算方法:氨基酸的平均分子量X氨基酸总的分子数(肽链数+肽键数)-18X脱水缩合的水分子数(和肽键数相等) 所以,你的答案是:128X(2+98)-18X98=11036
@钦乔3196：蛋白的分子量是多大的时候是大蛋白 -
扈韵15398692129…… 300KD左右的都叫大蛋白,如果做WB实验的不容易做成功,而且marker不好买,不过如果做WB实验建议你送南京奥青生物公司去做,服务还不错,自己也省的烦.
@钦乔3196：蛋白质的分子量的计算题 -
扈韵15398692129…… 这题眼熟. b个碱基【对】的基因能转录出含b【个】碱基的mRNA. b【个】碱基的mRNA中最多含b/3个密码子. b/3个密码子最多可以翻译出b/3个氨基酸(高中阶段一般不考虑终止密码子). b/3个氨基酸形成n条肽链. 那么形成的肽键数是(b/3-n). 形成一个肽键脱去一分子的水,则脱水(b/3-n)个. 水的相对分子质量是18. 所以这个蛋白质的分子量是,所有氨基酸分子量之和减去形成肽链时脱去的水的分子量之和. 式子是:a*(b/3)-(b/3-n)*18,再整理一下就可以了.
@钦乔3196：求WB高手解惑:我的蛋白分子量91KD,该用多少浓度的胶,上样量多少啊? -
扈韵15398692129…… 10%的分离胶,上样量一般10微升-15微升
