x-gal和iptg的作用
@平翰3871：x - gal amp iptg在目的基因转化感受态细胞中的作用 -
平园18445735737…… x-gal是显色剂,amp是抗生素,iptg是诱导剂.在蓝白斑筛选中,iptg可以诱导x-gal显色.amp用于抗性筛选.
@平翰3871：IPTG的作用 - 作业帮
平园18445735737…… [答案] 蓝白斑筛选时的诱导剂,诱导基因表达β-半乳糖苷酶,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落.
@平翰3871：标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么? -
平园18445735737…… 质粒上有两个或两个以上标记基因是为了使用方便.而且两个标记基因的功能是不一样的.比如我们最常用的PUC18/19等,一个是氨苄抗性,另一个是LAC Z基因. 前一个基因的存在,让我们在培养时加入氨苄可以让细菌时刻把这个质粒带着,如果不加氨苄,细菌肯定会把这个质粒丢掉的(毕竟质粒相对于细胞来说是一个包袱,但当氨苄存在时,如果细菌把质粒丢了,细菌便不能抗氨苄而被杀死). 而LAC Z基因是为我们插入目的基因筛选而用的.LAC Z基因本身在IPTG和x-gal的作用下,而产生兰斑.而且这个基因上有很多的酶切位点,方便我们插入自己想要的基因.而我们的基因插入后,把LAC Z基因破坏了,不能产生兰斑.这就是兰白斑筛选.
@平翰3871：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
平园18445735737…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@平翰3871：研究启动子 报告基因 用什么好 -
平园18445735737…… 可以用大肠杆菌乳糖操纵子的结构基因,通过菌落的“蓝白筛选”可以直观看到.需要加入诱导物IPTG和底物X-gal,如果你的启动子有效,可以使得它后面的乳糖操纵子的结构基因转录,并且翻译出半乳糖苷酶,他会作用于X-gal使得菌落出现蓝色.这需要构建质粒.
@平翰3871：基因克隆中蓝白斑筛选法筛选阳性克隆的原理. -
平园18445735737…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@平翰3871：1 如何检测细菌是否感染噬菌体.10分 2 M13 噬菌体感染细菌的条件.10分 -
平园18445735737…… 噬菌体有烈性的和非烈性噬菌体.烈性的噬菌体侵染细菌后会快速造成细菌菌体裂解,培养液呈现清凉透明有破碎残渣.非裂解性的可以铺顶层琼脂板(可以查阅噬菌体滴度的测试实验方案),培养后看顶层琼脂层中有没有噬菌斑,也可以在底层培养基中加些IPTG/X-gal若噬菌体带有lacZ的还有蓝白斑筛选的作用(如M13KE的噬菌斑显现蓝斑).不知道你的菌是否是抗性菌,可以找些XL1-blue(Tet抗性)加抗性培养一段时间到对数期再接种你认为有噬菌体污染的样品(非Tet抗性)后铺顶层琼脂培养查看噬菌斑. M13噬菌体侵染细菌一般需要细菌带有F-pilus(性菌毛)才可以介导噬菌体的侵染过程.这一类的雄性菌比如TG1、XL1-blue等.
@平翰3871：如何区分杂菌污染还是感染了噬菌体 -
平园18445735737…… 杂菌污染是其他细菌与培养基上的培养细菌竞争,甚至于抑制或杀死,比如青霉菌,葡萄球菌.当然有时也可能进入的是真菌,丝状真菌放线菌等等.噬菌体感染是病毒的感染,噬菌体寄生于细菌内.进行自我繁殖复制,然后是细菌破裂死亡.区分主要在于,噬菌体是一种病毒,和细菌不是个类别的生物.噬菌体有烈性的和非烈性噬菌体.烈性的噬菌体侵染细菌后会快速造成细菌菌体裂解,培养液呈现清凉透明有破碎残渣.非裂解性的可以铺顶层琼脂板(可以查阅噬菌体滴度的测试实验方案),培养后看顶层琼脂层中有没有噬菌斑,也可以在底层培养基中加些IPTG/X-gal若噬菌体带有lacZ的还有蓝白斑筛选的作用(如M13KE的噬菌斑显现蓝斑).
@平翰3871：蓝白斑筛选 -
平园18445735737…… α-互补 的原理 载体上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列.这个编码区中插入了一个多克隆位点,但并没有破坏lacZ的阅读框架,不影响其正常功能.E. coli DH5α菌株带有β-半乳糖苷酶C端部分...
平园18445735737…… x-gal是显色剂,amp是抗生素,iptg是诱导剂.在蓝白斑筛选中,iptg可以诱导x-gal显色.amp用于抗性筛选.
@平翰3871：IPTG的作用 - 作业帮
平园18445735737…… [答案] 蓝白斑筛选时的诱导剂,诱导基因表达β-半乳糖苷酶,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落.
@平翰3871：标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么? -
平园18445735737…… 质粒上有两个或两个以上标记基因是为了使用方便.而且两个标记基因的功能是不一样的.比如我们最常用的PUC18/19等,一个是氨苄抗性,另一个是LAC Z基因. 前一个基因的存在,让我们在培养时加入氨苄可以让细菌时刻把这个质粒带着,如果不加氨苄,细菌肯定会把这个质粒丢掉的(毕竟质粒相对于细胞来说是一个包袱,但当氨苄存在时,如果细菌把质粒丢了,细菌便不能抗氨苄而被杀死). 而LAC Z基因是为我们插入目的基因筛选而用的.LAC Z基因本身在IPTG和x-gal的作用下,而产生兰斑.而且这个基因上有很多的酶切位点,方便我们插入自己想要的基因.而我们的基因插入后,把LAC Z基因破坏了,不能产生兰斑.这就是兰白斑筛选.
@平翰3871：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
平园18445735737…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@平翰3871：研究启动子 报告基因 用什么好 -
平园18445735737…… 可以用大肠杆菌乳糖操纵子的结构基因,通过菌落的“蓝白筛选”可以直观看到.需要加入诱导物IPTG和底物X-gal,如果你的启动子有效,可以使得它后面的乳糖操纵子的结构基因转录,并且翻译出半乳糖苷酶,他会作用于X-gal使得菌落出现蓝色.这需要构建质粒.
@平翰3871：基因克隆中蓝白斑筛选法筛选阳性克隆的原理. -
平园18445735737…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@平翰3871：1 如何检测细菌是否感染噬菌体.10分 2 M13 噬菌体感染细菌的条件.10分 -
平园18445735737…… 噬菌体有烈性的和非烈性噬菌体.烈性的噬菌体侵染细菌后会快速造成细菌菌体裂解,培养液呈现清凉透明有破碎残渣.非裂解性的可以铺顶层琼脂板(可以查阅噬菌体滴度的测试实验方案),培养后看顶层琼脂层中有没有噬菌斑,也可以在底层培养基中加些IPTG/X-gal若噬菌体带有lacZ的还有蓝白斑筛选的作用(如M13KE的噬菌斑显现蓝斑).不知道你的菌是否是抗性菌,可以找些XL1-blue(Tet抗性)加抗性培养一段时间到对数期再接种你认为有噬菌体污染的样品(非Tet抗性)后铺顶层琼脂培养查看噬菌斑. M13噬菌体侵染细菌一般需要细菌带有F-pilus(性菌毛)才可以介导噬菌体的侵染过程.这一类的雄性菌比如TG1、XL1-blue等.
@平翰3871：如何区分杂菌污染还是感染了噬菌体 -
平园18445735737…… 杂菌污染是其他细菌与培养基上的培养细菌竞争,甚至于抑制或杀死,比如青霉菌,葡萄球菌.当然有时也可能进入的是真菌,丝状真菌放线菌等等.噬菌体感染是病毒的感染,噬菌体寄生于细菌内.进行自我繁殖复制,然后是细菌破裂死亡.区分主要在于,噬菌体是一种病毒,和细菌不是个类别的生物.噬菌体有烈性的和非烈性噬菌体.烈性的噬菌体侵染细菌后会快速造成细菌菌体裂解,培养液呈现清凉透明有破碎残渣.非裂解性的可以铺顶层琼脂板(可以查阅噬菌体滴度的测试实验方案),培养后看顶层琼脂层中有没有噬菌斑,也可以在底层培养基中加些IPTG/X-gal若噬菌体带有lacZ的还有蓝白斑筛选的作用(如M13KE的噬菌斑显现蓝斑).
@平翰3871：蓝白斑筛选 -
平园18445735737…… α-互补 的原理 载体上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列.这个编码区中插入了一个多克隆位点,但并没有破坏lacZ的阅读框架,不影响其正常功能.E. coli DH5α菌株带有β-半乳糖苷酶C端部分...
