提取rna过程中rna降解原因
@窦蚂3285：怎么解决细菌rna提取过程中 rna降解的问题 -
蔡满18480071151…… RNA在实验过程中要一直考虑RNAse的影响,整个操作都要抑制RNA酶的活性,你在实验过程中应该严格执行这样的规范,比如仪器用DEPC处理,低温操作等等.
@窦蚂3285：为什么提取RNA时出现一坨白色沉淀 -
蔡满18480071151…… 组织RNA抽提失败的两大现象是:RNA降解和组织内杂质的残留.关于降解问题,首先看一下为什么从培养细胞中抽提RNA不容易降解.现有的RNA抽提试剂,都含有快速抑制Rnase的成分.在培养细胞中加入裂解液,简单的混匀,即可使所有...
@窦蚂3285：提取组织RNA时,如何减少RNA的降解!
蔡满18480071151…… 1:所有用到的枪头、离心管都要在0.1%的DEPC水里浸泡过夜够,灭菌烘干使用.当然这些耗材都有现成商业化的买. 2:所有实验中用到水的地方都是0.1%的DEPC水(灭菌失活). 3:液氮研磨,裂解时间不宜太长,需要纯化的,粗提出的RNA尽快纯化,不要放太长时间. 4:去NDA时,DNA酶处理的时间要短,不超过30分钟. 5:尽量在低温的条件下操作.戴口罩,在冰上操作时注意不要有水碰到管口.自来水,人说话时的口气,唾沫都会污染RNA.
@窦蚂3285：怎样解决RNA用DNase处理过程中的降解问题 -
蔡满18480071151…… 降解方法可以用Takara,两步法先把RNA转为CDNA,然后再PCR,这样不需要每次提RNA,也可以一步法加入Total RNA. 处理细节: 提取的时候,用到的器具需要DEPC的水处理后高压.去除外源性的RNA酶对实验影响,用Trizol的话,分层取小心吸取,宁少取. 电泳时可以用无RNA酶的水配制的TBS,然后150v,10min,若电泳时间长,产生的热也容易使RNA降解. 同时电泳也可以说明蛋白质去除是否完全.
@窦蚂3285：提取RNA时,28SRNA是怎么降解成18SRNA和5SRNA的呢 -
蔡满18480071151…… 真核细胞里面含有四种rRNA,分别是5S、5.8S、18S和28S,分别具有大约120、160、1900和4700个核苷酸. 28S是28S,18S是18S,5S是5S,这里的S是沉降系数,不能用加减法算的. 提取人或哺乳动物的RNA,电泳一般可以看到两条很亮的电泳带,在溴酚蓝的后面.前面的是18S,后面的是28S.前后带的亮度比均为1:2,而且溴酚蓝附近的小分子带(也就是所谓5S带)很弱,说明提取的RNA质量很好.
@窦蚂3285：如何判断提取的真核细胞rna是否有降解或者有dna和有机溶剂的污染 -
蔡满18480071151…… RNA的降解可以通过跑电泳来看,完整的RNA提取出来是有三条s带的,比如真核生物的28s18s5s三条带,可以通过测OD值来看是否有DNA和其他污染
@窦蚂3285：在RNA提取过程中需要注意哪些方面以防止RNA的降解啊? - 作业帮
蔡满18480071151…… [答案] 最好用液氮,价钱也不贵,而且研钵等也不用处理,因为液氮温度太低了,磨样时RNase根本不起作用,待加入Trizon后,也更不怕RNase了.
@窦蚂3285：总rna的电泳过程中提示有rna的降解是在什么情况下 -
蔡满18480071151…… RNA电泳后可以看见有三条条带,都是rRNA.一般来说,看见两条的也可以用,要是啥也看不见,模模糊糊的,那就是降解了.
@窦蚂3285：提取的DNA中含有较多的RNA,加什么可以消除 -
蔡满18480071151…… DNA比RNA稳定很多,一般情况下是很少导致RNA污染的,可能提取过程中低温操作的缘故; 可采用室温离心而非4度,RNA自然降解; 如果还不行的话,可在操作过程中加入1-2微升的RNase,也无需专门37度水浴,室温操作,问题自然解决.
@窦蚂3285：在提取RNA的过程中为什么在沸水浴上加热30min?RNA会被破坏吗? - 作业帮
蔡满18480071151…… [答案] 提取RNA的方法常用稀碱法和浓盐法.前者利用稀碱溶解细胞壁,使RNA释放出来,这种方法提取时间短,但RNA在此条件下不稳定,容易分解 后者在加热的条件下,利用高浓度的盐改变细胞膜的透性,使RNA释放出来.所以加热的条件是降低细胞膜...
蔡满18480071151…… RNA在实验过程中要一直考虑RNAse的影响,整个操作都要抑制RNA酶的活性,你在实验过程中应该严格执行这样的规范,比如仪器用DEPC处理,低温操作等等.
@窦蚂3285：为什么提取RNA时出现一坨白色沉淀 -
蔡满18480071151…… 组织RNA抽提失败的两大现象是:RNA降解和组织内杂质的残留.关于降解问题,首先看一下为什么从培养细胞中抽提RNA不容易降解.现有的RNA抽提试剂,都含有快速抑制Rnase的成分.在培养细胞中加入裂解液,简单的混匀,即可使所有...
@窦蚂3285：提取组织RNA时,如何减少RNA的降解!
蔡满18480071151…… 1:所有用到的枪头、离心管都要在0.1%的DEPC水里浸泡过夜够,灭菌烘干使用.当然这些耗材都有现成商业化的买. 2:所有实验中用到水的地方都是0.1%的DEPC水(灭菌失活). 3:液氮研磨,裂解时间不宜太长,需要纯化的,粗提出的RNA尽快纯化,不要放太长时间. 4:去NDA时,DNA酶处理的时间要短,不超过30分钟. 5:尽量在低温的条件下操作.戴口罩,在冰上操作时注意不要有水碰到管口.自来水,人说话时的口气,唾沫都会污染RNA.
@窦蚂3285：怎样解决RNA用DNase处理过程中的降解问题 -
蔡满18480071151…… 降解方法可以用Takara,两步法先把RNA转为CDNA,然后再PCR,这样不需要每次提RNA,也可以一步法加入Total RNA. 处理细节: 提取的时候,用到的器具需要DEPC的水处理后高压.去除外源性的RNA酶对实验影响,用Trizol的话,分层取小心吸取,宁少取. 电泳时可以用无RNA酶的水配制的TBS,然后150v,10min,若电泳时间长,产生的热也容易使RNA降解. 同时电泳也可以说明蛋白质去除是否完全.
@窦蚂3285：提取RNA时,28SRNA是怎么降解成18SRNA和5SRNA的呢 -
蔡满18480071151…… 真核细胞里面含有四种rRNA,分别是5S、5.8S、18S和28S,分别具有大约120、160、1900和4700个核苷酸. 28S是28S,18S是18S,5S是5S,这里的S是沉降系数,不能用加减法算的. 提取人或哺乳动物的RNA,电泳一般可以看到两条很亮的电泳带,在溴酚蓝的后面.前面的是18S,后面的是28S.前后带的亮度比均为1:2,而且溴酚蓝附近的小分子带(也就是所谓5S带)很弱,说明提取的RNA质量很好.
@窦蚂3285：如何判断提取的真核细胞rna是否有降解或者有dna和有机溶剂的污染 -
蔡满18480071151…… RNA的降解可以通过跑电泳来看,完整的RNA提取出来是有三条s带的,比如真核生物的28s18s5s三条带,可以通过测OD值来看是否有DNA和其他污染
@窦蚂3285：在RNA提取过程中需要注意哪些方面以防止RNA的降解啊? - 作业帮
蔡满18480071151…… [答案] 最好用液氮,价钱也不贵,而且研钵等也不用处理,因为液氮温度太低了,磨样时RNase根本不起作用,待加入Trizon后,也更不怕RNase了.
@窦蚂3285：总rna的电泳过程中提示有rna的降解是在什么情况下 -
蔡满18480071151…… RNA电泳后可以看见有三条条带,都是rRNA.一般来说,看见两条的也可以用,要是啥也看不见,模模糊糊的,那就是降解了.
@窦蚂3285：提取的DNA中含有较多的RNA,加什么可以消除 -
蔡满18480071151…… DNA比RNA稳定很多,一般情况下是很少导致RNA污染的,可能提取过程中低温操作的缘故; 可采用室温离心而非4度,RNA自然降解; 如果还不行的话,可在操作过程中加入1-2微升的RNase,也无需专门37度水浴,室温操作,问题自然解决.
@窦蚂3285：在提取RNA的过程中为什么在沸水浴上加热30min?RNA会被破坏吗? - 作业帮
蔡满18480071151…… [答案] 提取RNA的方法常用稀碱法和浓盐法.前者利用稀碱溶解细胞壁,使RNA释放出来,这种方法提取时间短,但RNA在此条件下不稳定,容易分解 后者在加热的条件下,利用高浓度的盐改变细胞膜的透性,使RNA释放出来.所以加热的条件是降低细胞膜...
