rna降解了还能测出浓度吗
@爱致4720：rna发生降解可以用于后续的荧光定量吗 -
谈缪17690022426…… 不可以,会什么都扩不出来或不准确,没有实验意义
@爱致4720：RNA提取后OD值及浓度都好为什么电泳未见条带啊 -
谈缪17690022426…… rna降解啦...若是电泳操作没问题,没见条带,就是没有完整的RNA,OD值,浓度值,只作参考,而且仪器无法分辨RNA是否降解.降解的RNA如果不含有DNA或者盐离子等其他杂质的话,测出来的浓度即OD值也是正常的.
@爱致4720：RNA 部分降解的标本 是否 还能做 相对定量PCR? -
谈缪17690022426…… 相对定量PCR是能做的,但是做出来的真实性就不敢保证了. 通过内参基因的矫正,可以作为你后续实验的借鉴.但是如果是非常重要的结果,可能奠定你以后实验的思路的话,建议还是用新鲜的标本再做一次. 最好是要验证RNA的完整性.做熟练了的话,很多时候一般……嗯……
@爱致4720：求助RNA浓度的问题 -
谈缪17690022426…… 1、提取RNA测浓度时A260/A280大于3的原因可能是降解.2、一般对于DNA,纯净的时候比值是1.8,而对于RNA则是接近2.0.如果超过这个值,那么最有可能的就是核酸降解了,因为寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比长链核苷酸要大,所以会使比值上升.
@爱致4720：人组织样本rna降解对测序结果会有影响吗 -
谈缪17690022426…… 会有影响 一般RNA-seq的测序有两种1. 用oligoT 结合polyA富集mRNA,这种情况对降解样本的RNA测序会有很大影响,测序的结果会出现5'段的缺失.2. 去除核糖体RNA后直接测序,这样测到的有mRNA和LncRNA,这样的会降解样本的影响会相对小一些,不过测序的数据量要求比较高一般要测到50M的reads.总体情况来说,降解样本测序肯定会有影响,一般样本实在取不到不讲解的样本,推荐用第二种会好一些.
@爱致4720：提取细胞RNA之后,为什么要测RNA浓度 -
谈缪17690022426…… 提取细胞RNA之后,为什么要测RNA浓度 1、提取RNA测浓度时 A260/A280 大于3的原因可能是降解. 2、一般对于DNA,纯净的时候比值是1.8,而对于RNA则是接近2.0.如果超过这个值,那么最有可能的就是核酸降解了,因为寡聚的核酸和...
@爱致4720：很郁闷,我提取的RNA电泳图几乎全黑,请问是怎么回事 -
谈缪17690022426…… 你是做什么电泳,如果是普通电泳,RNA污染量不大的话可能看不到,如果比较大的话会成弥散的条带,因为在电泳过程中会降解,如果提取的RNA质量较好,电泳过程没有降解掉的话,可能会有一条比较清晰的条带在目的条带的下方,因为RNA电泳比DNA跑的快.般来说不是PCR出现拖尾算还正常的的,但是拖尾且看不到主要条带or好几条条带 那应该是说明DNA不纯埃.
@爱致4720：如何用分光光度计测量核酸的浓度 -
谈缪17690022426…… 方便,灵敏,除了知道含量,还知道组成成分,比如od260/od280低了,就说明蛋白等杂志多了.但是,不知道质量,比如真核rna:跑胶的话有三条带,说明你的rna抽的不错,但是用分光光度计虽能测出rna含量高,但是我们不知道是不是被降...
@爱致4720：如何说明DNA提取中有RNA污染?只跑电泳的话RNA污染是否看得出来?(测OD值得方法我大概知道) -
谈缪17690022426…… 测OD的方法是测不出RNA污染的,因为RNA的260/280的值和DNA近似.电泳检测的话,主要是看RNA的含量.换而言之,实际上最相关的是你提取的时候的组织的生长状况.一般来说,如果是分生组织等提取的DNA,会有较大的RNA污染.这时候你做电泳可以明确看到RNA的条带,而且有时候会比DNA带更为明显.如果提取过程中RNA降解了,那么你会看到你的DNA条带下面有一片很亮的拖带.如果你提取的组织是种子阿孢子阿等休眠组织时,由于这些组织生命活动并不旺盛,你提取的DNA就很有可能看不到任何RNA的污染,当然这并不代表没有,只不过你看不到罢了.
谈缪17690022426…… 不可以,会什么都扩不出来或不准确,没有实验意义
@爱致4720：RNA提取后OD值及浓度都好为什么电泳未见条带啊 -
谈缪17690022426…… rna降解啦...若是电泳操作没问题,没见条带,就是没有完整的RNA,OD值,浓度值,只作参考,而且仪器无法分辨RNA是否降解.降解的RNA如果不含有DNA或者盐离子等其他杂质的话,测出来的浓度即OD值也是正常的.
@爱致4720：RNA 部分降解的标本 是否 还能做 相对定量PCR? -
谈缪17690022426…… 相对定量PCR是能做的,但是做出来的真实性就不敢保证了. 通过内参基因的矫正,可以作为你后续实验的借鉴.但是如果是非常重要的结果,可能奠定你以后实验的思路的话,建议还是用新鲜的标本再做一次. 最好是要验证RNA的完整性.做熟练了的话,很多时候一般……嗯……
@爱致4720：求助RNA浓度的问题 -
谈缪17690022426…… 1、提取RNA测浓度时A260/A280大于3的原因可能是降解.2、一般对于DNA,纯净的时候比值是1.8,而对于RNA则是接近2.0.如果超过这个值,那么最有可能的就是核酸降解了,因为寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比长链核苷酸要大,所以会使比值上升.
@爱致4720：人组织样本rna降解对测序结果会有影响吗 -
谈缪17690022426…… 会有影响 一般RNA-seq的测序有两种1. 用oligoT 结合polyA富集mRNA,这种情况对降解样本的RNA测序会有很大影响,测序的结果会出现5'段的缺失.2. 去除核糖体RNA后直接测序,这样测到的有mRNA和LncRNA,这样的会降解样本的影响会相对小一些,不过测序的数据量要求比较高一般要测到50M的reads.总体情况来说,降解样本测序肯定会有影响,一般样本实在取不到不讲解的样本,推荐用第二种会好一些.
@爱致4720：提取细胞RNA之后,为什么要测RNA浓度 -
谈缪17690022426…… 提取细胞RNA之后,为什么要测RNA浓度 1、提取RNA测浓度时 A260/A280 大于3的原因可能是降解. 2、一般对于DNA,纯净的时候比值是1.8,而对于RNA则是接近2.0.如果超过这个值,那么最有可能的就是核酸降解了,因为寡聚的核酸和...
@爱致4720：很郁闷,我提取的RNA电泳图几乎全黑,请问是怎么回事 -
谈缪17690022426…… 你是做什么电泳,如果是普通电泳,RNA污染量不大的话可能看不到,如果比较大的话会成弥散的条带,因为在电泳过程中会降解,如果提取的RNA质量较好,电泳过程没有降解掉的话,可能会有一条比较清晰的条带在目的条带的下方,因为RNA电泳比DNA跑的快.般来说不是PCR出现拖尾算还正常的的,但是拖尾且看不到主要条带or好几条条带 那应该是说明DNA不纯埃.
@爱致4720：如何用分光光度计测量核酸的浓度 -
谈缪17690022426…… 方便,灵敏,除了知道含量,还知道组成成分,比如od260/od280低了,就说明蛋白等杂志多了.但是,不知道质量,比如真核rna:跑胶的话有三条带,说明你的rna抽的不错,但是用分光光度计虽能测出rna含量高,但是我们不知道是不是被降...
@爱致4720：如何说明DNA提取中有RNA污染?只跑电泳的话RNA污染是否看得出来?(测OD值得方法我大概知道) -
谈缪17690022426…… 测OD的方法是测不出RNA污染的,因为RNA的260/280的值和DNA近似.电泳检测的话,主要是看RNA的含量.换而言之,实际上最相关的是你提取的时候的组织的生长状况.一般来说,如果是分生组织等提取的DNA,会有较大的RNA污染.这时候你做电泳可以明确看到RNA的条带,而且有时候会比DNA带更为明显.如果提取过程中RNA降解了,那么你会看到你的DNA条带下面有一片很亮的拖带.如果你提取的组织是种子阿孢子阿等休眠组织时,由于这些组织生命活动并不旺盛,你提取的DNA就很有可能看不到任何RNA的污染,当然这并不代表没有,只不过你看不到罢了.
