rna放在常温2小时会降解嘛
@井饰708：取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 -
通祝17339493080…… 取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 细胞在离体后数分钟后开始死亡,注意是开始死亡,其实还有好多细胞存活,RNA在体内就处于不断降解的过程中,离体后速度逐渐加快,所以速冻越快越好,但是也不用过于紧张,即使放上半小时里面还有完整RNA存在,只是比例很低了,如果用于做NORTHERN肯定不行,但如果做一些不是表达效率很低的基因的RT的话还有机会的(经验之谈). 至于DEPC洗的问题,由于上述原因,只要操作迅速,其实剪子之类意义不大,毕竟细胞释放的酶应该比剪子上带的多多了,当然,洗洗也没坏处,更保险
@井饰708：我想采集提rna的样品,在解剖后可以用冰冷冻一段时间再采样吗, -
通祝17339493080…… 根据我的经验,其实RNA也没有传说中的那么容易降解,组织中RNA含量很高,即使降解也降解不了多少,就可以直接放在4度冰箱,你也可以做个实验对比看看4度存放与液氮存放所提取的RNA差距有多大.并不建议放在-20度,这个存放时间最好不要超过一个星期.如果你实在担心RNA降解,那就放在液氮中.
@井饰708：组织在室温时间较长还能提rna吗 -
通祝17339493080…… 无液氮rna组织样品保存液,huayueyang的,去地里直接采集的样品直接泡在里面,rna就不会降解,提出来的rna泡在里面,常温存放就行了
@井饰708：如何去除DNA中的RNA? -
通祝17339493080…… 1.DNA样品中加适量RNA酶(0.1~0.3ul) 37 ℃水浴保温30min. 2.DNA样品放一段时间,RNA自动降解因为RNA没有比DNA稳定. 3.DNA溶于酚但是RNA不溶. 你看看情况那个方法比较好. 如果不去除RNA酶对于DNA不会有什么影响.
@井饰708：提取RNA,用水溶解后跑胶,跑胶这段时间RNA要保存在那里啊, -
通祝17339493080…… 几个小时放在冰上没问题!我现在正在做这个! 如果你当天还要用rna做下一步试验的话就别冻起来,冻融循环也会导致其少量降解,如果下一步提取mrna的话直接用是最好的啦!
@井饰708：如何去除DNA样品中的RNA -
通祝17339493080…… 如何去除DNA样品中的RNA 1.DNA样品中加适量RNA酶(0.0.3ul) 37 ℃水浴保温30min. 2.DNA样品放一段时间,RNA自动降解因为RNA没有比DNA稳定. 3.DNA溶于酚但是RNA不溶.
@井饰708：小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了吗 -
通祝17339493080…… 小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了 提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液.一般是1:1进行配制.用的裂解液我们是RIPA. 将组织用液氮研磨碎了,然后按量加入裂解液,细胞量在10七次方左右是100微升.冰浴裂解20分钟(间断摇动).然后4摄氏度离心12000rpm,15分钟. 胰腺组织含多种类型的细胞,要想提取胰岛A细胞的RNA,首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来,可以用流式细胞分选或磁珠分选等. 获得高纯度的胰岛A细胞后,再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了.
@井饰708：rna提取怎么室温干燥 -
通祝17339493080…… rna提取怎么室温干燥RNA提取步骤及注意事项(仅供参考):实验步骤如下:1.取50—100mg的组织,加入1ml Trizol试剂,用匀浆器打匀(Trizol先放于冰上).2.将匀浆室温放置5min.3.加入200μl氯仿,剧烈震荡混匀30s,冰上静置3min.4....
@井饰708：我的总RNA降解了吗 -
通祝17339493080…… 如果你还活着,你的总RNA肯定没有降解.活细胞内的RNA与蛋白质和其他大分子物质一样,也是处于不断地生成与降解之中,但总的有效量是不会变的,至少变化不大.所以,你的总RNA没有降解.
@井饰708：在提取RNA的过程中为什么在沸水浴上加热30min?RNA会被破坏吗? -
通祝17339493080…… 提取RNA的方法常用稀碱法和浓盐法.前者利用稀碱溶解细胞壁,使RNA释放出来,这种方法提取时间短,但RNA在此条件下不稳定,容易分解 后者在加热的条件下,利用高浓度的盐改变细胞膜的透性,使RNA释放出来.所以加热的条件是降低细胞膜的表明张力,破坏磷酸双酯层.帮助高浓度盐破坏细胞膜,有助于RNA的释放;还可将蛋白质变性,有助于RNA的提取分离. RNA不会变性,PCR反应的温度也几近于沸水温度,只是双链的变性,并没有降解,RNA之间的化学键能承受这样的温度,只是不能停留太久,因为细胞中的磷酸二酯酶和磷酸单酯酶在此温度范围比较活跃,会使RNA降解而降低提取率.
通祝17339493080…… 取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 细胞在离体后数分钟后开始死亡,注意是开始死亡,其实还有好多细胞存活,RNA在体内就处于不断降解的过程中,离体后速度逐渐加快,所以速冻越快越好,但是也不用过于紧张,即使放上半小时里面还有完整RNA存在,只是比例很低了,如果用于做NORTHERN肯定不行,但如果做一些不是表达效率很低的基因的RT的话还有机会的(经验之谈). 至于DEPC洗的问题,由于上述原因,只要操作迅速,其实剪子之类意义不大,毕竟细胞释放的酶应该比剪子上带的多多了,当然,洗洗也没坏处,更保险
@井饰708：我想采集提rna的样品,在解剖后可以用冰冷冻一段时间再采样吗, -
通祝17339493080…… 根据我的经验,其实RNA也没有传说中的那么容易降解,组织中RNA含量很高,即使降解也降解不了多少,就可以直接放在4度冰箱,你也可以做个实验对比看看4度存放与液氮存放所提取的RNA差距有多大.并不建议放在-20度,这个存放时间最好不要超过一个星期.如果你实在担心RNA降解,那就放在液氮中.
@井饰708：组织在室温时间较长还能提rna吗 -
通祝17339493080…… 无液氮rna组织样品保存液,huayueyang的,去地里直接采集的样品直接泡在里面,rna就不会降解,提出来的rna泡在里面,常温存放就行了
@井饰708：如何去除DNA中的RNA? -
通祝17339493080…… 1.DNA样品中加适量RNA酶(0.1~0.3ul) 37 ℃水浴保温30min. 2.DNA样品放一段时间,RNA自动降解因为RNA没有比DNA稳定. 3.DNA溶于酚但是RNA不溶. 你看看情况那个方法比较好. 如果不去除RNA酶对于DNA不会有什么影响.
@井饰708：提取RNA,用水溶解后跑胶,跑胶这段时间RNA要保存在那里啊, -
通祝17339493080…… 几个小时放在冰上没问题!我现在正在做这个! 如果你当天还要用rna做下一步试验的话就别冻起来,冻融循环也会导致其少量降解,如果下一步提取mrna的话直接用是最好的啦!
@井饰708：如何去除DNA样品中的RNA -
通祝17339493080…… 如何去除DNA样品中的RNA 1.DNA样品中加适量RNA酶(0.0.3ul) 37 ℃水浴保温30min. 2.DNA样品放一段时间,RNA自动降解因为RNA没有比DNA稳定. 3.DNA溶于酚但是RNA不溶.
@井饰708：小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了吗 -
通祝17339493080…… 小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了 提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液.一般是1:1进行配制.用的裂解液我们是RIPA. 将组织用液氮研磨碎了,然后按量加入裂解液,细胞量在10七次方左右是100微升.冰浴裂解20分钟(间断摇动).然后4摄氏度离心12000rpm,15分钟. 胰腺组织含多种类型的细胞,要想提取胰岛A细胞的RNA,首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来,可以用流式细胞分选或磁珠分选等. 获得高纯度的胰岛A细胞后,再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了.
@井饰708：rna提取怎么室温干燥 -
通祝17339493080…… rna提取怎么室温干燥RNA提取步骤及注意事项(仅供参考):实验步骤如下:1.取50—100mg的组织,加入1ml Trizol试剂,用匀浆器打匀(Trizol先放于冰上).2.将匀浆室温放置5min.3.加入200μl氯仿,剧烈震荡混匀30s,冰上静置3min.4....
@井饰708：我的总RNA降解了吗 -
通祝17339493080…… 如果你还活着,你的总RNA肯定没有降解.活细胞内的RNA与蛋白质和其他大分子物质一样,也是处于不断地生成与降解之中,但总的有效量是不会变的,至少变化不大.所以,你的总RNA没有降解.
@井饰708：在提取RNA的过程中为什么在沸水浴上加热30min?RNA会被破坏吗? -
通祝17339493080…… 提取RNA的方法常用稀碱法和浓盐法.前者利用稀碱溶解细胞壁,使RNA释放出来,这种方法提取时间短,但RNA在此条件下不稳定,容易分解 后者在加热的条件下,利用高浓度的盐改变细胞膜的透性,使RNA释放出来.所以加热的条件是降低细胞膜的表明张力,破坏磷酸双酯层.帮助高浓度盐破坏细胞膜,有助于RNA的释放;还可将蛋白质变性,有助于RNA的提取分离. RNA不会变性,PCR反应的温度也几近于沸水温度,只是双链的变性,并没有降解,RNA之间的化学键能承受这样的温度,只是不能停留太久,因为细胞中的磷酸二酯酶和磷酸单酯酶在此温度范围比较活跃,会使RNA降解而降低提取率.
