组织rna室温多久降解
@沙柯3993：小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了吗 -
郎所17860001537…… 小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了 提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液.一般是1:1进行配制.用的裂解液我们是RIPA. 将组织用液氮研磨碎了,然后按量加入裂解液,细胞量在10七次方左右是100微升.冰浴裂解20分钟(间断摇动).然后4摄氏度离心12000rpm,15分钟. 胰腺组织含多种类型的细胞,要想提取胰岛A细胞的RNA,首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来,可以用流式细胞分选或磁珠分选等. 获得高纯度的胰岛A细胞后,再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了.
@沙柯3993：取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 -
郎所17860001537…… 取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 细胞在离体后数分钟后开始死亡,注意是开始死亡,其实还有好多细胞存活,RNA在体内就处于不断降解的过程中,离体后速度逐渐加快,所以速冻越快越好,但是也不用过于紧张,即使放上半小时里面还有完整RNA存在,只是比例很低了,如果用于做NORTHERN肯定不行,但如果做一些不是表达效率很低的基因的RT的话还有机会的(经验之谈). 至于DEPC洗的问题,由于上述原因,只要操作迅速,其实剪子之类意义不大,毕竟细胞释放的酶应该比剪子上带的多多了,当然,洗洗也没坏处,更保险
@沙柯3993：rna提取怎么室温干燥 -
郎所17860001537…… rna提取怎么室温干燥RNA提取步骤及注意事项(仅供参考):实验步骤如下:1.取50—100mg的组织,加入1ml Trizol试剂,用匀浆器打匀(Trizol先放于冰上).2.将匀浆室温放置5min.3.加入200μl氯仿,剧烈震荡混匀30s,冰上静置3min.4....
@沙柯3993：组织在室温时间较长还能提rna吗 -
郎所17860001537…… 无液氮rna组织样品保存液,huayueyang的,去地里直接采集的样品直接泡在里面,rna就不会降解,提出来的rna泡在里面,常温存放就行了
@沙柯3993：RNA提取用什么方法,具体的步骤?
郎所17860001537…… 1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积不应超过TRIzol体积10℅. b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用...
@沙柯3993：动物RNA的提取 -
郎所17860001537…… RNA的提取 一、准备试剂: 氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制). 二、操作步骤: 1. 匀浆处理: a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理....
@沙柯3993：rna提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些 -
郎所17860001537…… 注意枪头管子里的RNA酶,注意你唾沫星子皮肤上存在的RNA酶,注意各种试剂中存在的RNA酶. 重要的事情说三遍. 剩下就是最后一步吸干点,吹干点,但别吹太过了.
@沙柯3993：我想采集提rna的样品,在解剖后可以用冰冷冻一段时间再采样吗, -
郎所17860001537…… 根据我的经验,其实RNA也没有传说中的那么容易降解,组织中RNA含量很高,即使降解也降解不了多少,就可以直接放在4度冰箱,你也可以做个实验对比看看4度存放与液氮存放所提取的RNA差距有多大.并不建议放在-20度,这个存放时间最好不要超过一个星期.如果你实在担心RNA降解,那就放在液氮中.
@沙柯3993：RNA提取的关键步骤是??? -
郎所17860001537…… 我只知道DNA的 析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢搅拌..朝一个方向..避免DNA折断
@沙柯3993：rna粗提后在4℃溶解4小时会降解吗? -
郎所17860001537…… 不会
郎所17860001537…… 小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了 提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液.一般是1:1进行配制.用的裂解液我们是RIPA. 将组织用液氮研磨碎了,然后按量加入裂解液,细胞量在10七次方左右是100微升.冰浴裂解20分钟(间断摇动).然后4摄氏度离心12000rpm,15分钟. 胰腺组织含多种类型的细胞,要想提取胰岛A细胞的RNA,首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来,可以用流式细胞分选或磁珠分选等. 获得高纯度的胰岛A细胞后,再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了.
@沙柯3993：取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 -
郎所17860001537…… 取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 细胞在离体后数分钟后开始死亡,注意是开始死亡,其实还有好多细胞存活,RNA在体内就处于不断降解的过程中,离体后速度逐渐加快,所以速冻越快越好,但是也不用过于紧张,即使放上半小时里面还有完整RNA存在,只是比例很低了,如果用于做NORTHERN肯定不行,但如果做一些不是表达效率很低的基因的RT的话还有机会的(经验之谈). 至于DEPC洗的问题,由于上述原因,只要操作迅速,其实剪子之类意义不大,毕竟细胞释放的酶应该比剪子上带的多多了,当然,洗洗也没坏处,更保险
@沙柯3993：rna提取怎么室温干燥 -
郎所17860001537…… rna提取怎么室温干燥RNA提取步骤及注意事项(仅供参考):实验步骤如下:1.取50—100mg的组织,加入1ml Trizol试剂,用匀浆器打匀(Trizol先放于冰上).2.将匀浆室温放置5min.3.加入200μl氯仿,剧烈震荡混匀30s,冰上静置3min.4....
@沙柯3993：组织在室温时间较长还能提rna吗 -
郎所17860001537…… 无液氮rna组织样品保存液,huayueyang的,去地里直接采集的样品直接泡在里面,rna就不会降解,提出来的rna泡在里面,常温存放就行了
@沙柯3993：RNA提取用什么方法,具体的步骤?
郎所17860001537…… 1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积不应超过TRIzol体积10℅. b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用...
@沙柯3993：动物RNA的提取 -
郎所17860001537…… RNA的提取 一、准备试剂: 氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制). 二、操作步骤: 1. 匀浆处理: a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理....
@沙柯3993：rna提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些 -
郎所17860001537…… 注意枪头管子里的RNA酶,注意你唾沫星子皮肤上存在的RNA酶,注意各种试剂中存在的RNA酶. 重要的事情说三遍. 剩下就是最后一步吸干点,吹干点,但别吹太过了.
@沙柯3993：我想采集提rna的样品,在解剖后可以用冰冷冻一段时间再采样吗, -
郎所17860001537…… 根据我的经验,其实RNA也没有传说中的那么容易降解,组织中RNA含量很高,即使降解也降解不了多少,就可以直接放在4度冰箱,你也可以做个实验对比看看4度存放与液氮存放所提取的RNA差距有多大.并不建议放在-20度,这个存放时间最好不要超过一个星期.如果你实在担心RNA降解,那就放在液氮中.
@沙柯3993：RNA提取的关键步骤是??? -
郎所17860001537…… 我只知道DNA的 析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢搅拌..朝一个方向..避免DNA折断
@沙柯3993：rna粗提后在4℃溶解4小时会降解吗? -
郎所17860001537…… 不会
