rna反复冻融几次会降解
@宣罗4069：如何从冻存的细胞提取RNA十万火 -
充矿17022809753…… 1). 将冻存管从液氮或冰箱中取出; 2). 不待细胞溶解,将Trizol500ul-1ml直接放入冻存管中,此时Trizol会冻成冰状; 3). 将冻存管缓慢融化,并用加样器吹打混匀; 4). 将细胞裂解液移至Eppendorf管中,16000′g离心1min,吸出管底絮状...
@宣罗4069：取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 -
充矿17022809753…… 取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 细胞在离体后数分钟后开始死亡,注意是开始死亡,其实还有好多细胞存活,RNA在体内就处于不断降解的过程中,离体后速度逐渐加快,所以速冻越快越好,但是也不用过于紧张,即使放上半小时里面还有完整RNA存在,只是比例很低了,如果用于做NORTHERN肯定不行,但如果做一些不是表达效率很低的基因的RT的话还有机会的(经验之谈). 至于DEPC洗的问题,由于上述原因,只要操作迅速,其实剪子之类意义不大,毕竟细胞释放的酶应该比剪子上带的多多了,当然,洗洗也没坏处,更保险
@宣罗4069：如何测定细胞壁破碎的程度 -
充矿17022809753…… 1、高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度.此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等.2、玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研...
@宣罗4069：用于提取RNA新鲜组织如何保存 -
充矿17022809753…… 市场上有一种非冰型RNA样品保存液.有些公司叫RNAwait,或者还有别的名称,你可以了解一下. 很多公司都有的. 非冻型组织细胞RNA保存液(RNAwait)是一种在较高温度下保存动物组织及细胞RNA样品的非冻型无毒溶液,它能迅速渗入细胞...
@宣罗4069： - 80度保种菌问题 -
充矿17022809753…… 上面几个回答似乎都不合题…… 据我所知,总DNA和总RNA的量应该不会变,总不至于你冻融几次DNA和RNA就挥发了吧?但是反复冻融很容易使细胞破壁,特别是G+细菌.所以会使你的冻存菌活性大打折扣.另外如果你的菌如果是含有外源质粒的,反复冻溶容易丢质粒. 所以建议你在保存甘油管的时候,多分装几管,尽量避免反复冻融.
@宣罗4069：百度同一个样 PCR 结果为什么不同
充矿17022809753…… 我也经常做pcr,我觉得很多因素都会影响到PCR结果,如温度,酶的量,酶的活性,主要还有模板的质量. 向我们做RNA的PCR 把样品从冰箱里拿出来每次冻融之后PCR结果都不太一样,因为样品会被降解,效果一次不如一次,而酶经过反复冷冻活性也会降低
@宣罗4069：RNA 如何保存 -
充矿17022809753…… 在野外采集,一般使用RNA later液可常温下保存.RNA later液为QIAGEN公司产品.
@宣罗4069：如何破坏RNA,而且不破坏DNA -
充矿17022809753…… 单链的RNA非常不稳定,和双链DNA混合后,一段时间,自然就会降解,而DNA要稳定得多.在DNA提取和质粒提取中,为了降解RNA,以免使DNA污染,一般有以下两个措施:1.加入RNase,即RNA酶,特异性降解RNA.2.在碱性环境中,RNA由于2'的羟基,非常不稳定,而相比之下,DNA就稳定多了.
@宣罗4069：提真菌RNA老是降解怎么回事? -
充矿17022809753…… 建议器具处理、灭菌要彻底,操作环境提前碰酒精,有条件可以用紫外照照,准备工作做好,放心大胆提就是了,你越勇敢RNase越脆弱...:Pzuodongyun(站内联系TA)降解得很厉害,首先要确定提取RNA的仪器和试剂没有RNAase污染,研钵研棒180度烘3-4h,其他要用的东西高压灭菌3次,试剂也要用RNAasefree water 配制;其次,在研磨的时候速度要快,防止冻融后细胞的内源RNAase降解,最好在无菌工作台内进行操作sunqx(站内联系TA)真菌 含多糖很多.陈思容(站内联系TA)降解的原因吧!条带不亮!我们实验室的师姐说TRIZOL法的提取效率不高,对于真菌来说!不如异硫酸氰胍法!
@宣罗4069：提取RNA,用水溶解后跑胶,跑胶这段时间RNA要保存在那里啊, -
充矿17022809753…… 几个小时放在冰上没问题!我现在正在做这个! 如果你当天还要用rna做下一步试验的话就别冻起来,冻融循环也会导致其少量降解,如果下一步提取mrna的话直接用是最好的啦!
充矿17022809753…… 1). 将冻存管从液氮或冰箱中取出; 2). 不待细胞溶解,将Trizol500ul-1ml直接放入冻存管中,此时Trizol会冻成冰状; 3). 将冻存管缓慢融化,并用加样器吹打混匀; 4). 将细胞裂解液移至Eppendorf管中,16000′g离心1min,吸出管底絮状...
@宣罗4069：取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 -
充矿17022809753…… 取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 细胞在离体后数分钟后开始死亡,注意是开始死亡,其实还有好多细胞存活,RNA在体内就处于不断降解的过程中,离体后速度逐渐加快,所以速冻越快越好,但是也不用过于紧张,即使放上半小时里面还有完整RNA存在,只是比例很低了,如果用于做NORTHERN肯定不行,但如果做一些不是表达效率很低的基因的RT的话还有机会的(经验之谈). 至于DEPC洗的问题,由于上述原因,只要操作迅速,其实剪子之类意义不大,毕竟细胞释放的酶应该比剪子上带的多多了,当然,洗洗也没坏处,更保险
@宣罗4069：如何测定细胞壁破碎的程度 -
充矿17022809753…… 1、高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度.此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等.2、玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研...
@宣罗4069：用于提取RNA新鲜组织如何保存 -
充矿17022809753…… 市场上有一种非冰型RNA样品保存液.有些公司叫RNAwait,或者还有别的名称,你可以了解一下. 很多公司都有的. 非冻型组织细胞RNA保存液(RNAwait)是一种在较高温度下保存动物组织及细胞RNA样品的非冻型无毒溶液,它能迅速渗入细胞...
@宣罗4069： - 80度保种菌问题 -
充矿17022809753…… 上面几个回答似乎都不合题…… 据我所知,总DNA和总RNA的量应该不会变,总不至于你冻融几次DNA和RNA就挥发了吧?但是反复冻融很容易使细胞破壁,特别是G+细菌.所以会使你的冻存菌活性大打折扣.另外如果你的菌如果是含有外源质粒的,反复冻溶容易丢质粒. 所以建议你在保存甘油管的时候,多分装几管,尽量避免反复冻融.
@宣罗4069：百度同一个样 PCR 结果为什么不同
充矿17022809753…… 我也经常做pcr,我觉得很多因素都会影响到PCR结果,如温度,酶的量,酶的活性,主要还有模板的质量. 向我们做RNA的PCR 把样品从冰箱里拿出来每次冻融之后PCR结果都不太一样,因为样品会被降解,效果一次不如一次,而酶经过反复冷冻活性也会降低
@宣罗4069：RNA 如何保存 -
充矿17022809753…… 在野外采集,一般使用RNA later液可常温下保存.RNA later液为QIAGEN公司产品.
@宣罗4069：如何破坏RNA,而且不破坏DNA -
充矿17022809753…… 单链的RNA非常不稳定,和双链DNA混合后,一段时间,自然就会降解,而DNA要稳定得多.在DNA提取和质粒提取中,为了降解RNA,以免使DNA污染,一般有以下两个措施:1.加入RNase,即RNA酶,特异性降解RNA.2.在碱性环境中,RNA由于2'的羟基,非常不稳定,而相比之下,DNA就稳定多了.
@宣罗4069：提真菌RNA老是降解怎么回事? -
充矿17022809753…… 建议器具处理、灭菌要彻底,操作环境提前碰酒精,有条件可以用紫外照照,准备工作做好,放心大胆提就是了,你越勇敢RNase越脆弱...:Pzuodongyun(站内联系TA)降解得很厉害,首先要确定提取RNA的仪器和试剂没有RNAase污染,研钵研棒180度烘3-4h,其他要用的东西高压灭菌3次,试剂也要用RNAasefree water 配制;其次,在研磨的时候速度要快,防止冻融后细胞的内源RNAase降解,最好在无菌工作台内进行操作sunqx(站内联系TA)真菌 含多糖很多.陈思容(站内联系TA)降解的原因吧!条带不亮!我们实验室的师姐说TRIZOL法的提取效率不高,对于真菌来说!不如异硫酸氰胍法!
@宣罗4069：提取RNA,用水溶解后跑胶,跑胶这段时间RNA要保存在那里啊, -
充矿17022809753…… 几个小时放在冰上没问题!我现在正在做这个! 如果你当天还要用rna做下一步试验的话就别冻起来,冻融循环也会导致其少量降解,如果下一步提取mrna的话直接用是最好的啦!
