组织反复冻融rna会降解吗
@水子6562：病毒核酸冻存会损失吗 -
蒯贵17629117578…… 这个问题不能用简单的会或者不会来回答.如果仅仅是提取出来的核酸,长期存于-80度以下,一般而言是不会有问题的,如果有反复冻融,是会降解的.
@水子6562：我想采集提rna的样品,在解剖后可以用冰冷冻一段时间再采样吗, -
蒯贵17629117578…… 根据我的经验,其实RNA也没有传说中的那么容易降解,组织中RNA含量很高,即使降解也降解不了多少,就可以直接放在4度冰箱,你也可以做个实验对比看看4度存放与液氮存放所提取的RNA差距有多大.并不建议放在-20度,这个存放时间最好不要超过一个星期.如果你实在担心RNA降解,那就放在液氮中.
@水子6562：用于提取RNA新鲜组织如何保存 -
蒯贵17629117578…… 市场上有一种非冰型RNA样品保存液.有些公司叫RNAwait,或者还有别的名称,你可以了解一下. 很多公司都有的. 非冻型组织细胞RNA保存液(RNAwait)是一种在较高温度下保存动物组织及细胞RNA样品的非冻型无毒溶液,它能迅速渗入细胞...
@水子6562：取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 -
蒯贵17629117578…… 取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 细胞在离体后数分钟后开始死亡,注意是开始死亡,其实还有好多细胞存活,RNA在体内就处于不断降解的过程中,离体后速度逐渐加快,所以速冻越快越好,但是也不用过于紧张,即使放上半小时里面还有完整RNA存在,只是比例很低了,如果用于做NORTHERN肯定不行,但如果做一些不是表达效率很低的基因的RT的话还有机会的(经验之谈). 至于DEPC洗的问题,由于上述原因,只要操作迅速,其实剪子之类意义不大,毕竟细胞释放的酶应该比剪子上带的多多了,当然,洗洗也没坏处,更保险
@水子6562： - 80度保种菌问题 -
蒯贵17629117578…… 上面几个回答似乎都不合题…… 据我所知,总DNA和总RNA的量应该不会变,总不至于你冻融几次DNA和RNA就挥发了吧?但是反复冻融很容易使细胞破壁,特别是G+细菌.所以会使你的冻存菌活性大打折扣.另外如果你的菌如果是含有外源质粒的,反复冻溶容易丢质粒. 所以建议你在保存甘油管的时候,多分装几管,尽量避免反复冻融.
@水子6562：解剖的时候怎么减少rna的降解 -
蒯贵17629117578…… 组织不要反复冻融 保持低温,不高于4度环境 保持细胞完整,不要造成细胞破碎 在细胞破碎步骤后全程保持trizol的存在 提取步骤中任何trizol不存在的时候所涉及的耗材和试剂使用rnase-free 以上
@水子6562：如何从冻存的细胞提取RNA十万火 -
蒯贵17629117578…… 1). 将冻存管从液氮或冰箱中取出; 2). 不待细胞溶解,将Trizol500ul-1ml直接放入冻存管中,此时Trizol会冻成冰状; 3). 将冻存管缓慢融化,并用加样器吹打混匀; 4). 将细胞裂解液移至Eppendorf管中,16000′g离心1min,吸出管底絮状...
@水子6562：RNAstore样本保存液 博凌科为的怎么样啊?跪求!!!! -
蒯贵17629117578…… 博凌科为 的 RNAstore样本保存液,用于保护样本R NA 完整性的非冻性试剂. RNAstore 是一种液态的、无毒的组织保存试剂.它能迅速渗入组织细胞中,通过高效抑制RNase活性从而保护非冷冻细胞中RNA于原位,使其更适合于组织基因表达...
@水子6562：小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了吗 -
蒯贵17629117578…… 小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了 提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液.一般是1:1进行配制.用的裂解液我们是RIPA. 将组织用液氮研磨碎了,然后按量加入裂解液,细胞量在10七次方左右是100微升.冰浴裂解20分钟(间断摇动).然后4摄氏度离心12000rpm,15分钟. 胰腺组织含多种类型的细胞,要想提取胰岛A细胞的RNA,首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来,可以用流式细胞分选或磁珠分选等. 获得高纯度的胰岛A细胞后,再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了.
@水子6562：为什么提取RNA时出现一坨白色沉淀 -
蒯贵17629117578…… 组织RNA抽提失败的两大现象是:RNA降解和组织内杂质的残留.关于降解问题,首先看一下为什么从培养细胞中抽提RNA不容易降解.现有的RNA抽提试剂,都含有快速抑制Rnase的成分.在培养细胞中加入裂解液,简单的混匀,即可使所有...
蒯贵17629117578…… 这个问题不能用简单的会或者不会来回答.如果仅仅是提取出来的核酸,长期存于-80度以下,一般而言是不会有问题的,如果有反复冻融,是会降解的.
@水子6562：我想采集提rna的样品,在解剖后可以用冰冷冻一段时间再采样吗, -
蒯贵17629117578…… 根据我的经验,其实RNA也没有传说中的那么容易降解,组织中RNA含量很高,即使降解也降解不了多少,就可以直接放在4度冰箱,你也可以做个实验对比看看4度存放与液氮存放所提取的RNA差距有多大.并不建议放在-20度,这个存放时间最好不要超过一个星期.如果你实在担心RNA降解,那就放在液氮中.
@水子6562：用于提取RNA新鲜组织如何保存 -
蒯贵17629117578…… 市场上有一种非冰型RNA样品保存液.有些公司叫RNAwait,或者还有别的名称,你可以了解一下. 很多公司都有的. 非冻型组织细胞RNA保存液(RNAwait)是一种在较高温度下保存动物组织及细胞RNA样品的非冻型无毒溶液,它能迅速渗入细胞...
@水子6562：取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 -
蒯贵17629117578…… 取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 细胞在离体后数分钟后开始死亡,注意是开始死亡,其实还有好多细胞存活,RNA在体内就处于不断降解的过程中,离体后速度逐渐加快,所以速冻越快越好,但是也不用过于紧张,即使放上半小时里面还有完整RNA存在,只是比例很低了,如果用于做NORTHERN肯定不行,但如果做一些不是表达效率很低的基因的RT的话还有机会的(经验之谈). 至于DEPC洗的问题,由于上述原因,只要操作迅速,其实剪子之类意义不大,毕竟细胞释放的酶应该比剪子上带的多多了,当然,洗洗也没坏处,更保险
@水子6562： - 80度保种菌问题 -
蒯贵17629117578…… 上面几个回答似乎都不合题…… 据我所知,总DNA和总RNA的量应该不会变,总不至于你冻融几次DNA和RNA就挥发了吧?但是反复冻融很容易使细胞破壁,特别是G+细菌.所以会使你的冻存菌活性大打折扣.另外如果你的菌如果是含有外源质粒的,反复冻溶容易丢质粒. 所以建议你在保存甘油管的时候,多分装几管,尽量避免反复冻融.
@水子6562：解剖的时候怎么减少rna的降解 -
蒯贵17629117578…… 组织不要反复冻融 保持低温,不高于4度环境 保持细胞完整,不要造成细胞破碎 在细胞破碎步骤后全程保持trizol的存在 提取步骤中任何trizol不存在的时候所涉及的耗材和试剂使用rnase-free 以上
@水子6562：如何从冻存的细胞提取RNA十万火 -
蒯贵17629117578…… 1). 将冻存管从液氮或冰箱中取出; 2). 不待细胞溶解,将Trizol500ul-1ml直接放入冻存管中,此时Trizol会冻成冰状; 3). 将冻存管缓慢融化,并用加样器吹打混匀; 4). 将细胞裂解液移至Eppendorf管中,16000′g离心1min,吸出管底絮状...
@水子6562：RNAstore样本保存液 博凌科为的怎么样啊?跪求!!!! -
蒯贵17629117578…… 博凌科为 的 RNAstore样本保存液,用于保护样本R NA 完整性的非冻性试剂. RNAstore 是一种液态的、无毒的组织保存试剂.它能迅速渗入组织细胞中,通过高效抑制RNase活性从而保护非冷冻细胞中RNA于原位,使其更适合于组织基因表达...
@水子6562：小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了吗 -
蒯贵17629117578…… 小鼠组织室温放过夜,蛋白和rna都降解了 提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液.一般是1:1进行配制.用的裂解液我们是RIPA. 将组织用液氮研磨碎了,然后按量加入裂解液,细胞量在10七次方左右是100微升.冰浴裂解20分钟(间断摇动).然后4摄氏度离心12000rpm,15分钟. 胰腺组织含多种类型的细胞,要想提取胰岛A细胞的RNA,首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来,可以用流式细胞分选或磁珠分选等. 获得高纯度的胰岛A细胞后,再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了.
@水子6562：为什么提取RNA时出现一坨白色沉淀 -
蒯贵17629117578…… 组织RNA抽提失败的两大现象是:RNA降解和组织内杂质的残留.关于降解问题,首先看一下为什么从培养细胞中抽提RNA不容易降解.现有的RNA抽提试剂,都含有快速抑制Rnase的成分.在培养细胞中加入裂解液,简单的混匀,即可使所有...
