蓝白斑筛选培养基
@古茅6626：如何制备用于蓝白筛选的培养基 -
申肾17727547655…… 先配置普通的LB培养基,然后高压灭菌后,让培养基冷却到60度左右,加入合适的抗生素(AMP等),接着倒平板.然后配置(20mg/ml)的X-gal(用二甲基甲酰胺溶解)和200mg/ml的IPTG(水溶).在做蓝白筛选前,在平板上加入40ul的X-gal和4ul的IPTG(注意顺序,IPTG加在X-gal液滴上),然后用玻璃棒均匀涂开,稍微干下后就可以涂转化的感受态细胞了,平板最好是现涂现用,虽然可以在四度冰箱中存一周左右,但会降低效果.X-gal易见光分解,不用灭菌储存在-20冰箱.IPTG配置储存液的时候需要过滤菌膜后才能使用.
@古茅6626：质粒dna的转化实验结果培养基上出现大量蓝斑和白斑分别是什么?为什么有这么多蓝斑? - 作业帮
申肾17727547655…… [答案] 你用的是蓝白斑筛选,白斑为插入目的基因片段的转化子,蓝斑则没有,挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证.百度蓝白斑筛选.
@古茅6626：关于蓝白斑筛选的遇到的问题我用的是DH5α甘油菌和PUC19做蓝白斑筛选,做了几次实验,(培养基是LB固体培养基,内含氨苄抗生素,等凝固之后在表面... - 作业帮
申肾17727547655…… [答案] 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@古茅6626：筛选产β - 半乳糖苷酶的菌种 -
申肾17727547655…… 1.平板筛选培养基:胰蛋白胨15g,蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏1g,NaCl 5g,琼脂15g,X-gal0.1g,蒸馏水1 000ml,pH 7.0~7.2.2.摇瓶筛选培养基:乳糖1%,胰蛋白胨15g,豆蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏3g,NaCl 5g,蒸馏水1000...
@古茅6626：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
申肾17727547655…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@古茅6626：蓝白斑筛选 -
申肾17727547655…… α-互补 的原理 载体上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列.这个编码区中插入了一个多克隆位点,但并没有破坏lacZ的阅读框架,不影响其正常功能.E. coli DH5α菌株带有β-半乳糖苷酶C端部分...
@古茅6626：长出的白斑一定是转基因的吗蓝白斑 -
申肾17727547655…… ...你是在说蓝白斑筛选吧~ 培养基中本身就有抗生素,转了质粒(含抗性基因)的细菌才能在培养基上长出来.而外源基因是插入在lacZ的α片段基因里面,所以插入了外源片段的质粒导入细菌后,细菌不能表达β半乳糖苷酶,所以菌落是白色;而转入空载体的菌落呈蓝色(培养基中的X-gel在β半乳糖苷酶作用下显蓝色).
@古茅6626：基因克隆中蓝白斑筛选法筛选阳性克隆的原理. -
申肾17727547655…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@古茅6626：关于蓝白斑筛选的遇到的问题 -
申肾17727547655…… 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@古茅6626：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
申肾17727547655…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
申肾17727547655…… 先配置普通的LB培养基,然后高压灭菌后,让培养基冷却到60度左右,加入合适的抗生素(AMP等),接着倒平板.然后配置(20mg/ml)的X-gal(用二甲基甲酰胺溶解)和200mg/ml的IPTG(水溶).在做蓝白筛选前,在平板上加入40ul的X-gal和4ul的IPTG(注意顺序,IPTG加在X-gal液滴上),然后用玻璃棒均匀涂开,稍微干下后就可以涂转化的感受态细胞了,平板最好是现涂现用,虽然可以在四度冰箱中存一周左右,但会降低效果.X-gal易见光分解,不用灭菌储存在-20冰箱.IPTG配置储存液的时候需要过滤菌膜后才能使用.
@古茅6626：质粒dna的转化实验结果培养基上出现大量蓝斑和白斑分别是什么?为什么有这么多蓝斑? - 作业帮
申肾17727547655…… [答案] 你用的是蓝白斑筛选,白斑为插入目的基因片段的转化子,蓝斑则没有,挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证.百度蓝白斑筛选.
@古茅6626：关于蓝白斑筛选的遇到的问题我用的是DH5α甘油菌和PUC19做蓝白斑筛选,做了几次实验,(培养基是LB固体培养基,内含氨苄抗生素,等凝固之后在表面... - 作业帮
申肾17727547655…… [答案] 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@古茅6626：筛选产β - 半乳糖苷酶的菌种 -
申肾17727547655…… 1.平板筛选培养基:胰蛋白胨15g,蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏1g,NaCl 5g,琼脂15g,X-gal0.1g,蒸馏水1 000ml,pH 7.0~7.2.2.摇瓶筛选培养基:乳糖1%,胰蛋白胨15g,豆蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏3g,NaCl 5g,蒸馏水1000...
@古茅6626：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
申肾17727547655…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@古茅6626：蓝白斑筛选 -
申肾17727547655…… α-互补 的原理 载体上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列.这个编码区中插入了一个多克隆位点,但并没有破坏lacZ的阅读框架,不影响其正常功能.E. coli DH5α菌株带有β-半乳糖苷酶C端部分...
@古茅6626：长出的白斑一定是转基因的吗蓝白斑 -
申肾17727547655…… ...你是在说蓝白斑筛选吧~ 培养基中本身就有抗生素,转了质粒(含抗性基因)的细菌才能在培养基上长出来.而外源基因是插入在lacZ的α片段基因里面,所以插入了外源片段的质粒导入细菌后,细菌不能表达β半乳糖苷酶,所以菌落是白色;而转入空载体的菌落呈蓝色(培养基中的X-gel在β半乳糖苷酶作用下显蓝色).
@古茅6626：基因克隆中蓝白斑筛选法筛选阳性克隆的原理. -
申肾17727547655…… 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
@古茅6626：关于蓝白斑筛选的遇到的问题 -
申肾17727547655…… 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
@古茅6626：蓝白斑筛选的分子机制是什么 -
申肾17727547655…… 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
