跑电泳加loading+buffer

@戈巩2295:跑电泳样品加了loading还要再加甘油吗 -
符闹15285117440…… 跑电泳样品加了loading还要再加甘油 需要确认几个方面的原因: 1.是否有未加甘油的样品的电泳结果,对照说明此问题是否由甘油引起.例如marker的结果. 2.电泳凝胶的配方是否有问题,如果以前也按这个比例成功电泳过,是偶发的情况,很可能是凝胶配制过程中出现问题 3.电泳过程中,电压和电流与往常相比是否正常?如果发现在同样电压设置下,电流有异常,则一方面要检查电泳缓冲液是否新配,或者是电泳槽是不是有什么放接触不是很好. 甘油由于增加了样品的粘稠度,确实会使得电泳后样品的条带与平常有差异.但是由于所给信息太少,也没有对照说明,只能通过上面的排除法去看有可能是什么原因引起的.

@戈巩2295:SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳中样品为什么要加loading buffer -
符闹15285117440…… 不加的话,你上的样,第一是没有指示作用,你不知道样品跑到哪里了,第二是上样液的密度大,可以沉在孔地下,把缓冲液挤出!

@戈巩2295:电泳时loading buffer和样品DNA比例多少 -
符闹15285117440…… 主要决定loading buffer的浓度,DNA样品上样buffer(商品化或者是实验室自己配置的)主要是6X的,如果你上样DNA的体积是10ul的话,你只需要加入2ul的6X loading buffer后,混匀上样即可.

@戈巩2295:电泳时loading buffer和样品DNA比例多少?实验室常用6x的,为毛有人用1:5,有人1:1呢?请大神解答,3Q~ -
符闹15285117440…… 这玩意,说白了就是溴酚蓝做一个参照,你不加都一样的能够跑出条带来,我从来都是1:10加的,没问题.所谓6X就是稀释6倍使用,你如果严格的话按1:5加.

@戈巩2295:跑琼脂糖凝胶时,加了loading buffer,为什么看不到指示剂的条带?
符闹15285117440…… loading buffer不是指示剂啊,它的作用是帮助你的样品进入加样孔的,有时候如果你电泳时间短的话是可以看到溴酚蓝前缘的,但如果时间较长,它就跑出去了,你是看不到的,电泳的时候起指示作用的应该加Marker吧

@戈巩2295:请教buffer和marker在跑电泳时的作用,还有loading buffer和loading marker在跑电泳时的作用,谢谢了
符闹15285117440…… loading buffer的功能主要有两个.第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔. 没听说过什么loading marker, marker是用来标示大小的,相当于在旁边放了个刻度尺,告诉你在多大的位置表示多大的DNA

@戈巩2295:DNA琼脂糖凝胶电泳的loading buffer作用是? -
符闹15285117440…… 作用:使DNA粘度增大,不要再点样中被漂离凝胶; 加入的指示剂 可指示前沿. 1*的浓度 是个经验.浓度太大,可能产生 DNA和buffer中物质难以分开,拖带;指示剂前沿太宽等 适当增加浓度 没问题,但没必要.

@戈巩2295:加loading buffer煮沸后有沉淀影响蛋白浓度么 -
符闹15285117440…… 这个是看你的目的了,如果你要跑还原性电泳,那么样品需要用含有β-巯基乙醇的loading buffer沸煮5分钟,这样使蛋白间的二硫键在还原剂β-巯基乙醇的作用下被打开,得到的是蛋白的一级结构.而非还原的电泳就是在loading buffer中不加入还原剂β-巯基乙醇,这样的电泳比较能够真实的反应蛋白当时的情况,比如二聚体或者多聚体之类的.

@戈巩2295:蛋白电泳时直接使用4*loading buffer煮蛋白,有没有什么问题? -
符闹15285117440…… 按照比例加入,必然不会出现问题.loading buffer的主要成分是SDS,甘油,溴酚蓝,TRIS,其中甘油的作用是使样品沉到点样孔中而不漂浮起来,SDS是结合蛋白质,使所有蛋白质所带电荷性质一样,但不同分子量的蛋白结合的SDS数量是不一样的.溴酚蓝是指示剂,可以用来观察大概的电泳过程,因为它在不同浓度的胶中泳动的速率不一样,从而也可以看做是一个蛋白样品,这样就可以直观的大概了解蛋白泳动到了哪个位置,但是只能看一个大概

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