bcl2蛋白分子量wb
@丁斧6495：做wb的bax和bcl - 2的目的蛋白时会出现时间长的细胞凋亡而导致内参出不来吗 -
伊狠17635846764…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD. 1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西. 2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@丁斧6495：请教Western blotting!我要做WB检测凋亡蛋白bcl - 2、fas、p53表达,请问能否在一张膜上加一抗时把三种蛋白的一抗都一起加?另外,做完SDS - PAGE电泳... - 作业帮
伊狠17635846764…… [答案] 楼主赶着出结果吗?三步并作两步,两步毁成一步……个人强烈不建议三种ist antibody加在一起,因为这样做,三种抗体的nonspecific bands会重叠,遮盖需要分辨的蛋白.除非,你能确定这三种抗体的基质特异性非常高,否则,洗出...
@丁斧6495：Bcl - 2与Bax是蛋白还是基因 -
伊狠17635846764…… bcl-2和bax既可以表示基因也可以表示蛋白 两个蛋白都可以通过相应的抗体进行WB检测
@丁斧6495：抗凋亡蛋白bcl - 2是如何磷酸化而失去抗凋亡活性的?
伊狠17635846764…… BCL-2基因是如何抑制凋亡的?一般研究提示,有以下几种可能:(1)在细胞凋亡中钙离子起着很重要的作用,细胞凋亡中的DNA消化,需要相关的钙离子依赖性核酸内切酶的参与,而BCL-2可以抑制内质网释放钙离子,使依赖于钙离子的核...
@丁斧6495：Bcl - 2与Bax两种蛋白结构的差异是什么? -
伊狠17635846764…… bcl-2基因家族及其相关蛋白bcl-2是研究最早的 与凋亡有关的基因,也是目前最受重视的调控细胞凋亡的基 因家族.按其对细胞凋亡的作用及同源结构分为3个亚家 族:(1)具有BH1-4保守结构区域,对细胞凋亡起抑制作 用,如bcl-2,Bcl-xl,Mcl-1...
@丁斧6495：WB试验之如何选择内参抗体 -
伊狠17635846764…… 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~
@丁斧6495：急切求解WB,RT - PCR,IHC生物学专业名词的详细解释,拜托! -
伊狠17635846764…… WB: whole blood 全血(即未经任何方式分部分离的血液) Western Blot,“Western免疫印迹法”.是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测.对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的...
@丁斧6495：您好!请教你几个问题:做WB需要多长时间?每张膜最多能测几个样品?几个指标? -
伊狠17635846764…… 做WB如果从组织/细胞开始提取蛋白来计算,起码需要三个工作日.如果已有蛋白质样品,从做胶开始算,则为两个工作日. 每张膜的样品数与所使用的跑胶系统有关,最常见的是10-15个上样孔的型号,一个孔放marker,剩下可以测n-1个样品.我用过最多的是25个孔. 能够在一张膜上测几种不同蛋白,跟目标蛋白分子量有关.如果各个蛋白之间的条带完全能够分开,抗体特异性强,不存在混淆的问题,则测两到三种蛋白是有可能的.
@丁斧6495：求WB高手解惑:我的蛋白分子量91KD,该用多少浓度的胶,上样量多少啊? - 作业帮
伊狠17635846764…… [答案] 10%的分离胶,上样量一般10微升-15微升
伊狠17635846764…… α-平滑肌肌动蛋白是23kD. 1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西. 2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
@丁斧6495：请教Western blotting!我要做WB检测凋亡蛋白bcl - 2、fas、p53表达,请问能否在一张膜上加一抗时把三种蛋白的一抗都一起加?另外,做完SDS - PAGE电泳... - 作业帮
伊狠17635846764…… [答案] 楼主赶着出结果吗?三步并作两步,两步毁成一步……个人强烈不建议三种ist antibody加在一起,因为这样做,三种抗体的nonspecific bands会重叠,遮盖需要分辨的蛋白.除非,你能确定这三种抗体的基质特异性非常高,否则,洗出...
@丁斧6495：Bcl - 2与Bax是蛋白还是基因 -
伊狠17635846764…… bcl-2和bax既可以表示基因也可以表示蛋白 两个蛋白都可以通过相应的抗体进行WB检测
@丁斧6495：抗凋亡蛋白bcl - 2是如何磷酸化而失去抗凋亡活性的?
伊狠17635846764…… BCL-2基因是如何抑制凋亡的?一般研究提示,有以下几种可能:(1)在细胞凋亡中钙离子起着很重要的作用,细胞凋亡中的DNA消化,需要相关的钙离子依赖性核酸内切酶的参与,而BCL-2可以抑制内质网释放钙离子,使依赖于钙离子的核...
@丁斧6495：Bcl - 2与Bax两种蛋白结构的差异是什么? -
伊狠17635846764…… bcl-2基因家族及其相关蛋白bcl-2是研究最早的 与凋亡有关的基因,也是目前最受重视的调控细胞凋亡的基 因家族.按其对细胞凋亡的作用及同源结构分为3个亚家 族:(1)具有BH1-4保守结构区域,对细胞凋亡起抑制作 用,如bcl-2,Bcl-xl,Mcl-1...
@丁斧6495：WB试验之如何选择内参抗体 -
伊狠17635846764…… 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~
@丁斧6495：急切求解WB,RT - PCR,IHC生物学专业名词的详细解释,拜托! -
伊狠17635846764…… WB: whole blood 全血(即未经任何方式分部分离的血液) Western Blot,“Western免疫印迹法”.是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测.对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的...
@丁斧6495：您好!请教你几个问题:做WB需要多长时间?每张膜最多能测几个样品?几个指标? -
伊狠17635846764…… 做WB如果从组织/细胞开始提取蛋白来计算,起码需要三个工作日.如果已有蛋白质样品,从做胶开始算,则为两个工作日. 每张膜的样品数与所使用的跑胶系统有关,最常见的是10-15个上样孔的型号,一个孔放marker,剩下可以测n-1个样品.我用过最多的是25个孔. 能够在一张膜上测几种不同蛋白,跟目标蛋白分子量有关.如果各个蛋白之间的条带完全能够分开,抗体特异性强,不存在混淆的问题,则测两到三种蛋白是有可能的.
@丁斧6495：求WB高手解惑:我的蛋白分子量91KD,该用多少浓度的胶,上样量多少啊? - 作业帮
伊狠17635846764…… [答案] 10%的分离胶,上样量一般10微升-15微升
