gapdh二抗是什么来源
@安宝2888：上完gapdh的抗体还要上二抗吗 -
卞冰18517076044…… 这涉及到抗体识别抗原的原理和抗体的结构. 比如你要检测的蛋白为A,它有a, b, c, d 四个表位(epitope),可以被抗体特异性认识.制作针对A的抗体是将蛋白A的一段,比如包含b+c段,打入兔子(最常见)或其他动物(山羊goat,大鼠rat...
@安宝2888：western blotting中的一抗和二抗有什么用 - 作业帮
卞冰18517076044…… [答案] 一抗就是针对你的蛋白的抗体,一般比较特异,若你的蛋白不是常见的,则需要定制(譬如用你的蛋白注射兔子) 二抗是针对一抗的抗体,看你的一抗来自哪种动物,它具有普遍性.不管你的蛋白是什么,只要是从某种动物譬如兔子中获得的一抗,...
@安宝2888：一抗 - 间接免疫荧光问题?1、一抗和二抗分别是什么2、间接免疫荧光技术是?
卞冰18517076044…… 直接法是每个抗原的抗体都要荧光标记,而且荧光标记后可能会影响抗体效价甚至失效.所以有人就发明了间接法,这样只要对相应的抗原做出相应的抗体,再用标记好的二抗结合上就行了,不用每个抗体都要荧光标记,而且对一抗的效价影响甚微. 我自己的经验是,直接法跟间接法的结果差不多,敏感性并不像猜测的那么明显,所以直接法还是比间接法有优势
@安宝2888：如何选择二抗 -
卞冰18517076044…… 首先确定你所选的检测蛋白的状态,比如有无标签,如6*HIS等. 选择一抗就根据检测蛋白的状态来选,如果有蛋白带标签,就选针对标签的抗体. 如果没有标签,那么就要自己制备一抗. 二抗的选择则主要根据一抗的来源来选择,如果一抗是鼠源的,二抗一般就选用羊抗鼠的就可以了.
@安宝2888：请问,GAPDH作为RT - PCR内参的原理是什么呀?我知道为什用它做内参了,就是不清楚怎么用它, - 作业帮
卞冰18517076044…… [答案] 一般认为一些持家基因的表达量在不同状态下变化不大,所以可以认为它们表达是恒定的,故而用来做内参 简而言之,就是... 要比较其中某基因A表达转录变化,就分别比较两个样品中A相对于GAPDH的表达即可.譬如,如果第一个条件下A:GAPDH...
@安宝2888：制备二抗的宿主,为什么应选择另外一种不同的动物 -
卞冰18517076044…… 二抗选择 (1)种属来源.主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可). (2)标记物的选择.有HRP、Biotin、荧光素等标记物.免疫组化,WB二抗主要选择HRP,Biotin标记的二抗,而免疫荧光染色可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗,如FITC、Cy3、PE等.
@安宝2888：生物试剂名的一个问题生物试剂名称一般有什么规则,比如:GAPDH,Rabbit Monoclonal Antibody 这个表示兔单抗,抗GAPDH的,对吗?有没有系统一点的... - 作业帮
卞冰18517076044…… [答案] 对的,看产品说明
@安宝2888：免疫荧光封闭时一定要二抗来源的吗 -
卞冰18517076044…… 建议使用二抗来源的血清,这样,如果样品对二抗来源有非特异吸附的话,在这一步就可以排除了,降低背景,提高信噪比,比较有利于显现一些弱的信号.如果封闭不好,二抗直接与样品结合,荧光背景高,就很难判断结果了.
@安宝2888：看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 -
卞冰18517076044…… 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.
卞冰18517076044…… 这涉及到抗体识别抗原的原理和抗体的结构. 比如你要检测的蛋白为A,它有a, b, c, d 四个表位(epitope),可以被抗体特异性认识.制作针对A的抗体是将蛋白A的一段,比如包含b+c段,打入兔子(最常见)或其他动物(山羊goat,大鼠rat...
@安宝2888：western blotting中的一抗和二抗有什么用 - 作业帮
卞冰18517076044…… [答案] 一抗就是针对你的蛋白的抗体,一般比较特异,若你的蛋白不是常见的,则需要定制(譬如用你的蛋白注射兔子) 二抗是针对一抗的抗体,看你的一抗来自哪种动物,它具有普遍性.不管你的蛋白是什么,只要是从某种动物譬如兔子中获得的一抗,...
@安宝2888：一抗 - 间接免疫荧光问题?1、一抗和二抗分别是什么2、间接免疫荧光技术是?
卞冰18517076044…… 直接法是每个抗原的抗体都要荧光标记,而且荧光标记后可能会影响抗体效价甚至失效.所以有人就发明了间接法,这样只要对相应的抗原做出相应的抗体,再用标记好的二抗结合上就行了,不用每个抗体都要荧光标记,而且对一抗的效价影响甚微. 我自己的经验是,直接法跟间接法的结果差不多,敏感性并不像猜测的那么明显,所以直接法还是比间接法有优势
@安宝2888：如何选择二抗 -
卞冰18517076044…… 首先确定你所选的检测蛋白的状态,比如有无标签,如6*HIS等. 选择一抗就根据检测蛋白的状态来选,如果有蛋白带标签,就选针对标签的抗体. 如果没有标签,那么就要自己制备一抗. 二抗的选择则主要根据一抗的来源来选择,如果一抗是鼠源的,二抗一般就选用羊抗鼠的就可以了.
@安宝2888：请问,GAPDH作为RT - PCR内参的原理是什么呀?我知道为什用它做内参了,就是不清楚怎么用它, - 作业帮
卞冰18517076044…… [答案] 一般认为一些持家基因的表达量在不同状态下变化不大,所以可以认为它们表达是恒定的,故而用来做内参 简而言之,就是... 要比较其中某基因A表达转录变化,就分别比较两个样品中A相对于GAPDH的表达即可.譬如,如果第一个条件下A:GAPDH...
@安宝2888：制备二抗的宿主,为什么应选择另外一种不同的动物 -
卞冰18517076044…… 二抗选择 (1)种属来源.主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可). (2)标记物的选择.有HRP、Biotin、荧光素等标记物.免疫组化,WB二抗主要选择HRP,Biotin标记的二抗,而免疫荧光染色可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗,如FITC、Cy3、PE等.
@安宝2888：生物试剂名的一个问题生物试剂名称一般有什么规则,比如:GAPDH,Rabbit Monoclonal Antibody 这个表示兔单抗,抗GAPDH的,对吗?有没有系统一点的... - 作业帮
卞冰18517076044…… [答案] 对的,看产品说明
@安宝2888：免疫荧光封闭时一定要二抗来源的吗 -
卞冰18517076044…… 建议使用二抗来源的血清,这样,如果样品对二抗来源有非特异吸附的话,在这一步就可以排除了,降低背景,提高信噪比,比较有利于显现一些弱的信号.如果封闭不好,二抗直接与样品结合,荧光背景高,就很难判断结果了.
@安宝2888：看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 -
卞冰18517076044…… 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.
