gapdh条带位置
@黄维5653：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
於琰18391264405…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@黄维5653：GADPH是什么 -
於琰18391264405…… GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
@黄维5653：western blot 的marker是怎么定的 -
於琰18391264405…… 电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以: 1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移; 2 确认转膜效率; 3 根据marker的条带估计分子量; 4 确定目的蛋白位置.
@黄维5653：pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任... - 作业帮
於琰18391264405…… [答案] 首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marker基因,但是你现在g...
@黄维5653：rna用荧光定量引物能扩出条带吗 -
於琰18391264405…… 可以用于正式实验的引物必须满足以下条件:a 溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为PCR产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,miRNA染料法检测时,溶解曲线的...
@黄维5653：RT - PCR 结果,请教问题可能出在哪一部分.谢谢
於琰18391264405…… 你提取的四个RNA中,除了2号浓度很低之外,另外三个肯定符合做RT-PCR的要求了,CDNA也是,浓度是够的. 而电泳图中PCR产物的1234都是引物二聚体,没有出现你的目的基因 所以我的判断是:问题出在PCR这一过程.有可能是引物设...
@黄维5653：PCR时小鼠GAPDH扩出条带而目的基因却扩不出是什么原因? -
於琰18391264405…… 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.一个解释,目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.
@黄维5653：Western Blot为什么必须要用内参 -
於琰18391264405…… 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
@黄维5653：反向PCR怎么做 -
於琰18391264405…… 反向pcr(inverse pcr)反向pcr是一种多聚合酶链式反应(pcr)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知rma成几何级数扩增.用适当的限制性内切裂解含核心区的rma,以产生适合于pcr扩增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子.pcr的引物同源于环上核心区的末端序列,但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区.这种反向pcr方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序.
於琰18391264405…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@黄维5653：GADPH是什么 -
於琰18391264405…… GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
@黄维5653：western blot 的marker是怎么定的 -
於琰18391264405…… 电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以: 1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移; 2 确认转膜效率; 3 根据marker的条带估计分子量; 4 确定目的蛋白位置.
@黄维5653：pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任... - 作业帮
於琰18391264405…… [答案] 首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marker基因,但是你现在g...
@黄维5653：rna用荧光定量引物能扩出条带吗 -
於琰18391264405…… 可以用于正式实验的引物必须满足以下条件:a 溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为PCR产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,miRNA染料法检测时,溶解曲线的...
@黄维5653：RT - PCR 结果,请教问题可能出在哪一部分.谢谢
於琰18391264405…… 你提取的四个RNA中,除了2号浓度很低之外,另外三个肯定符合做RT-PCR的要求了,CDNA也是,浓度是够的. 而电泳图中PCR产物的1234都是引物二聚体,没有出现你的目的基因 所以我的判断是:问题出在PCR这一过程.有可能是引物设...
@黄维5653：PCR时小鼠GAPDH扩出条带而目的基因却扩不出是什么原因? -
於琰18391264405…… 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.一个解释,目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.
@黄维5653：Western Blot为什么必须要用内参 -
於琰18391264405…… 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
@黄维5653：反向PCR怎么做 -
於琰18391264405…… 反向pcr(inverse pcr)反向pcr是一种多聚合酶链式反应(pcr)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知rma成几何级数扩增.用适当的限制性内切裂解含核心区的rma,以产生适合于pcr扩增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子.pcr的引物同源于环上核心区的末端序列,但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区.这种反向pcr方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序.
