x-gal作用是什么
@盖是5483：利用α - 互补现象筛选带有插入片段的重组克隆的原理是什么? -
昌堵18784248299…… 现在使用的许多载体都带有一个E.coli DNA的短区段,其中含有β-半乳糖苷酶的-α肽基因(lacZ')的调控序列和头146个氨基酸的编码信息.这个编码区中插入了一个MCS,它并不破坏读框,但是可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基...
@盖是5483：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
昌堵18784248299…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@盖是5483：x - gal amp iptg在目的基因转化感受态细胞中的作用 -
昌堵18784248299…… x-gal是显色剂,amp是抗生素,iptg是诱导剂.在蓝白斑筛选中,iptg可以诱导x-gal显色.amp用于抗性筛选.
@盖是5483：标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么? -
昌堵18784248299…… 质粒上有两个或两个以上标记基因是为了使用方便.而且两个标记基因的功能是不一样的.比如我们最常用的PUC18/19等,一个是氨苄抗性,另一个是LAC Z基因. 前一个基因的存在,让我们在培养时加入氨苄可以让细菌时刻把这个质粒带着,如果不加氨苄,细菌肯定会把这个质粒丢掉的(毕竟质粒相对于细胞来说是一个包袱,但当氨苄存在时,如果细菌把质粒丢了,细菌便不能抗氨苄而被杀死). 而LAC Z基因是为我们插入目的基因筛选而用的.LAC Z基因本身在IPTG和x-gal的作用下,而产生兰斑.而且这个基因上有很多的酶切位点,方便我们插入自己想要的基因.而我们的基因插入后,把LAC Z基因破坏了,不能产生兰斑.这就是兰白斑筛选.
@盖是5483：基因工程中 目的基因与运载体结合的成功率 -
昌堵18784248299…… 是这样的,一般我们用两个检测标准 第一个是标记基因,用来检测是否运载体进入到受体细胞里面.例子:运载体里面带有一个抵抗抗生素的基因.那么把所有受体细胞(比如,大肠杆菌)撒在培养皿上之后,培养皿中有抗生素,只有当运载体...
@盖是5483：在DNA测序前,将目的基因转化入大肠杆菌后,用来培养大肠杆菌的固体培养基中加入的药品是什么及作用? -
昌堵18784248299…… LB培养基 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L酵母提取物(Yeast extract) 5g/L氯化钠(NaCl) 10g/L 琼脂粉15g/L 作用:养细菌 抗生素,Amp+ Kan+什么的 作用:做筛选,质粒上有抗性基因,转入质粒的阳性菌就会在抗生素平板上活下来.现在很少用蓝白斑了,公司的载体都很好,自连的概率在可接受范围了已经.
@盖是5483：什么是选择性培养基?什么是鉴别性培养基?二者有何区别和联系?试举一例并分析其原理? -
昌堵18784248299…… 选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基.其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌,从而提高该菌的筛选效率.如以纤维素作唯一碳源的培养基可分散到分解纤维素的微生物.分散酵母菌和霉菌时,可添加适量的青霉素、四环素或链霉素,以抑制细菌和放线菌的生长. 鉴别性培养基是在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基,此类培养基一般用于鉴定不同微生物.如EMB即伊红美蓝乳糖造就基.大肠杆菌分解乳糖孕育发生大量混淆酸,可染上酸性伊红,伊红又和美蓝结合,菌落被染成深紫色,从菌落外貌的发射光中还可以看到绿色金属发光.
昌堵18784248299…… 现在使用的许多载体都带有一个E.coli DNA的短区段,其中含有β-半乳糖苷酶的-α肽基因(lacZ')的调控序列和头146个氨基酸的编码信息.这个编码区中插入了一个MCS,它并不破坏读框,但是可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基...
@盖是5483：IPTG用来筛选蓝白斑需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败了! -
昌堵18784248299…… 需要搭配X-gal来用,IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质,这样就能看到蓝色,如果lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现蓝白斑的筛选了.根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用.
@盖是5483：x - gal amp iptg在目的基因转化感受态细胞中的作用 -
昌堵18784248299…… x-gal是显色剂,amp是抗生素,iptg是诱导剂.在蓝白斑筛选中,iptg可以诱导x-gal显色.amp用于抗性筛选.
@盖是5483：标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么? -
昌堵18784248299…… 质粒上有两个或两个以上标记基因是为了使用方便.而且两个标记基因的功能是不一样的.比如我们最常用的PUC18/19等,一个是氨苄抗性,另一个是LAC Z基因. 前一个基因的存在,让我们在培养时加入氨苄可以让细菌时刻把这个质粒带着,如果不加氨苄,细菌肯定会把这个质粒丢掉的(毕竟质粒相对于细胞来说是一个包袱,但当氨苄存在时,如果细菌把质粒丢了,细菌便不能抗氨苄而被杀死). 而LAC Z基因是为我们插入目的基因筛选而用的.LAC Z基因本身在IPTG和x-gal的作用下,而产生兰斑.而且这个基因上有很多的酶切位点,方便我们插入自己想要的基因.而我们的基因插入后,把LAC Z基因破坏了,不能产生兰斑.这就是兰白斑筛选.
@盖是5483：基因工程中 目的基因与运载体结合的成功率 -
昌堵18784248299…… 是这样的,一般我们用两个检测标准 第一个是标记基因,用来检测是否运载体进入到受体细胞里面.例子:运载体里面带有一个抵抗抗生素的基因.那么把所有受体细胞(比如,大肠杆菌)撒在培养皿上之后,培养皿中有抗生素,只有当运载体...
@盖是5483：在DNA测序前,将目的基因转化入大肠杆菌后,用来培养大肠杆菌的固体培养基中加入的药品是什么及作用? -
昌堵18784248299…… LB培养基 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L酵母提取物(Yeast extract) 5g/L氯化钠(NaCl) 10g/L 琼脂粉15g/L 作用:养细菌 抗生素,Amp+ Kan+什么的 作用:做筛选,质粒上有抗性基因,转入质粒的阳性菌就会在抗生素平板上活下来.现在很少用蓝白斑了,公司的载体都很好,自连的概率在可接受范围了已经.
@盖是5483：什么是选择性培养基?什么是鉴别性培养基?二者有何区别和联系?试举一例并分析其原理? -
昌堵18784248299…… 选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基.其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌,从而提高该菌的筛选效率.如以纤维素作唯一碳源的培养基可分散到分解纤维素的微生物.分散酵母菌和霉菌时,可添加适量的青霉素、四环素或链霉素,以抑制细菌和放线菌的生长. 鉴别性培养基是在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基,此类培养基一般用于鉴定不同微生物.如EMB即伊红美蓝乳糖造就基.大肠杆菌分解乳糖孕育发生大量混淆酸,可染上酸性伊红,伊红又和美蓝结合,菌落被染成深紫色,从菌落外貌的发射光中还可以看到绿色金属发光.
