actin内参原理
@利咳761：western blot内参抗体actin为什么出了好几条带 -
沙琬13910253482…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@利咳761：为什么用β - actin做内参? -
沙琬13910253482…… 因为β-action在不同组织中表达量基本一致.
@利咳761：急急急,,用actin基因检测反转录结果,是什么个原理?请具体点,易懂点,谢谢.. -
沙琬13910253482…… actin在各个组织里是组成型表达,并且表达量相对稳定、一致. 用它检查反转录结果原因有:1.因为是组成型表达,所以无论你是什么组织RNA反转,最后的cDNA里都含有actin,如果检测到了,说明反转没有问题,如果没有检测到,说明反转出了问题; 2.因为表达量相对稳定、一致,actin也可以作为检测反转效率有没有差异的一个标准,如果actin PCR的条带相对一致,说明这一系列的模板反转效率大体一致,可以用来做RT表达量比较. PS:actin并不是唯一的检测基因,一般都是配合ub7,tublin,18sRNA等看家基因一起检测.研究表明actin的表达量有一定的组织特异性.
@利咳761：PCR反应体系中的Actin是什么 -
沙琬13910253482…… 定量或半定量PCR中内参的一种,全称是β-Actin
@利咳761：如何选择合适的细胞核内参抗体?
沙琬13910253482…… Actin是细胞骨架的主要成分,具有高度保守性,在细胞中的表达相对稳定,广泛表达于真核细胞中,大小在42kDa-43kDa之间.研究发现Actin可以调控细胞收缩、调节细胞分裂、细胞器移动、花粉管顶端生长等活动,在植物的幼芽、生长组织、花基、萌发的种子和花序中均稳定表达. 选择合适的植物内参,首先考虑样本来源,植物样本需要选用植物细胞表达稳定的蛋白比如Actin或者Rubisco作为内参;其次要考虑目的蛋白的分子量大小,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量相差5kD以上,例如某植物目的蛋白大小在50kD左右,就可以选用Actin作为WB实验的内参;最后,从特异性、稳定性以及效价方面考虑,建议选用单克隆抗体更好一些.
@利咳761：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
沙琬13910253482…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
@利咳761：Western Blot为什么必须要用内参 -
沙琬13910253482…… 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
@利咳761：Western Blot都可以用beta - actin做内参吗? -
沙琬13910253482…… 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin 做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用: 1、如果目的蛋白检测不...
@利咳761：【求助】为什么做PCR要做β -
沙琬13910253482…… β-actin是什么意思?为什么叫β-actin内参?在做PCR或者荧光定量PCR时为什么要做β-actin内参对照?如果没有做内参结果就不可靠吗?即使跑胶的效果很好.谢谢各位师兄师姐的指教β-actin...
沙琬13910253482…… 首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
@利咳761：为什么用β - actin做内参? -
沙琬13910253482…… 因为β-action在不同组织中表达量基本一致.
@利咳761：急急急,,用actin基因检测反转录结果,是什么个原理?请具体点,易懂点,谢谢.. -
沙琬13910253482…… actin在各个组织里是组成型表达,并且表达量相对稳定、一致. 用它检查反转录结果原因有:1.因为是组成型表达,所以无论你是什么组织RNA反转,最后的cDNA里都含有actin,如果检测到了,说明反转没有问题,如果没有检测到,说明反转出了问题; 2.因为表达量相对稳定、一致,actin也可以作为检测反转效率有没有差异的一个标准,如果actin PCR的条带相对一致,说明这一系列的模板反转效率大体一致,可以用来做RT表达量比较. PS:actin并不是唯一的检测基因,一般都是配合ub7,tublin,18sRNA等看家基因一起检测.研究表明actin的表达量有一定的组织特异性.
@利咳761：PCR反应体系中的Actin是什么 -
沙琬13910253482…… 定量或半定量PCR中内参的一种,全称是β-Actin
@利咳761：如何选择合适的细胞核内参抗体?
沙琬13910253482…… Actin是细胞骨架的主要成分,具有高度保守性,在细胞中的表达相对稳定,广泛表达于真核细胞中,大小在42kDa-43kDa之间.研究发现Actin可以调控细胞收缩、调节细胞分裂、细胞器移动、花粉管顶端生长等活动,在植物的幼芽、生长组织、花基、萌发的种子和花序中均稳定表达. 选择合适的植物内参,首先考虑样本来源,植物样本需要选用植物细胞表达稳定的蛋白比如Actin或者Rubisco作为内参;其次要考虑目的蛋白的分子量大小,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量相差5kD以上,例如某植物目的蛋白大小在50kD左右,就可以选用Actin作为WB实验的内参;最后,从特异性、稳定性以及效价方面考虑,建议选用单克隆抗体更好一些.
@利咳761：以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 -
沙琬13910253482…… 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
@利咳761：Western Blot为什么必须要用内参 -
沙琬13910253482…… 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
@利咳761：Western Blot都可以用beta - actin做内参吗? -
沙琬13910253482…… 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin 做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用: 1、如果目的蛋白检测不...
@利咳761：【求助】为什么做PCR要做β -
沙琬13910253482…… β-actin是什么意思?为什么叫β-actin内参?在做PCR或者荧光定量PCR时为什么要做β-actin内参对照?如果没有做内参结果就不可靠吗?即使跑胶的效果很好.谢谢各位师兄师姐的指教β-actin...
