gapdh的二抗是什么
@步沈5204：上完gapdh的抗体还要上二抗吗 -
祝典14762043031…… 这涉及到抗体识别抗原的原理和抗体的结构. 比如你要检测的蛋白为A,它有a, b, c, d 四个表位(epitope),可以被抗体特异性认识.制作针对A的抗体是将蛋白A的一段,比如包含b+c段,打入兔子(最常见)或其他动物(山羊goat,大鼠rat...
@步沈5204：求助选择什么作为内参 -
祝典14762043031…… 搞不太清楚你想说什么.内参抗体一般选择 β-actin,GAPDH.hsp90也OK.一般内参抗体都是鼠源的埃既然一抗是鼠源,二抗是接HRP的羊抗鼠就很好理解埃
@步沈5204：western blot的抗体怎么选择? -
祝典14762043031…… 做原核表达蛋白western一个要注意的问题就是上样的蛋白不能太大,最好在100ng以下.以防止因为蛋白量太大引起非特异性信号.
@步沈5204：western中目标抗体出现,内参出不来是为什么啊? -
祝典14762043031…… 1. 二抗的种属没弄错吧 目的基因和内参都是什么种属来源的? 2. “动脉抽出蛋白”是什么意思? 用动脉组织制备的蛋白质样品?
@步沈5204：Western Blot蛋白印迹膜再生液Stripping Buffer,博凌科为的怎么样啊?有没有谁用过的? -
祝典14762043031…… 博凌科为的 Lipofect 转染试剂 !我见不少实验室都在用他们的试剂,还有很多大学的医学部都在用如果是不好的话,他们肯定做不进去吧!所以答案是肯定的了! 博凌科为的产品还是很值得信赖的! 产品简介 Western Blot中完成了一抗二抗结...
@步沈5204：sp法中一抗、二抗指的是什么?
祝典14762043031…… 一抗、二抗 一抗是针对抗原的抗体,二抗是针对一抗的抗体.即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体. 第一抗体就是平常所说的抗体,即能和抗原特异性结合. 第二抗体是能和抗体结合的,即抗体的抗体.主要用于检测抗体的存在. e.g.利...
@步沈5204：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
祝典14762043031…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@步沈5204：这是我设计的罗非鱼GAPDH基因的引物,各位高手看看有没有什么问题啊?最近我跑RT - PCR老失败! -
祝典14762043031…… 做RT首先确定RNA没有问题,这是前提;然后你这对引物,即使是直接扩增DNA也比较困难,给你俩建议,第一,尽量把突变的碱基放在最5端的位置,你的下游引物突变点有点靠近中间了,不是特别好;第二,把你的引物加长一些或者是设置在GC含量相对高一点的位置以使其退火温度高于60度,这样只要你的RNA没有问题就一定做得出来.你要想用现在的这对引物可以,建议你换好的酶,不然不好做.PP并不是设计引物好的软件,但不知道为什么国内都用它,其实它很业余.
@步沈5204：看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 -
祝典14762043031…… 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.
祝典14762043031…… 这涉及到抗体识别抗原的原理和抗体的结构. 比如你要检测的蛋白为A,它有a, b, c, d 四个表位(epitope),可以被抗体特异性认识.制作针对A的抗体是将蛋白A的一段,比如包含b+c段,打入兔子(最常见)或其他动物(山羊goat,大鼠rat...
@步沈5204：求助选择什么作为内参 -
祝典14762043031…… 搞不太清楚你想说什么.内参抗体一般选择 β-actin,GAPDH.hsp90也OK.一般内参抗体都是鼠源的埃既然一抗是鼠源,二抗是接HRP的羊抗鼠就很好理解埃
@步沈5204：western blot的抗体怎么选择? -
祝典14762043031…… 做原核表达蛋白western一个要注意的问题就是上样的蛋白不能太大,最好在100ng以下.以防止因为蛋白量太大引起非特异性信号.
@步沈5204：western中目标抗体出现,内参出不来是为什么啊? -
祝典14762043031…… 1. 二抗的种属没弄错吧 目的基因和内参都是什么种属来源的? 2. “动脉抽出蛋白”是什么意思? 用动脉组织制备的蛋白质样品?
@步沈5204：Western Blot蛋白印迹膜再生液Stripping Buffer,博凌科为的怎么样啊?有没有谁用过的? -
祝典14762043031…… 博凌科为的 Lipofect 转染试剂 !我见不少实验室都在用他们的试剂,还有很多大学的医学部都在用如果是不好的话,他们肯定做不进去吧!所以答案是肯定的了! 博凌科为的产品还是很值得信赖的! 产品简介 Western Blot中完成了一抗二抗结...
@步沈5204：sp法中一抗、二抗指的是什么?
祝典14762043031…… 一抗、二抗 一抗是针对抗原的抗体,二抗是针对一抗的抗体.即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体. 第一抗体就是平常所说的抗体,即能和抗原特异性结合. 第二抗体是能和抗体结合的,即抗体的抗体.主要用于检测抗体的存在. e.g.利...
@步沈5204：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
祝典14762043031…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@步沈5204：这是我设计的罗非鱼GAPDH基因的引物,各位高手看看有没有什么问题啊?最近我跑RT - PCR老失败! -
祝典14762043031…… 做RT首先确定RNA没有问题,这是前提;然后你这对引物,即使是直接扩增DNA也比较困难,给你俩建议,第一,尽量把突变的碱基放在最5端的位置,你的下游引物突变点有点靠近中间了,不是特别好;第二,把你的引物加长一些或者是设置在GC含量相对高一点的位置以使其退火温度高于60度,这样只要你的RNA没有问题就一定做得出来.你要想用现在的这对引物可以,建议你换好的酶,不然不好做.PP并不是设计引物好的软件,但不知道为什么国内都用它,其实它很业余.
@步沈5204：看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 -
祝典14762043031…… 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.
