gapdh基因条带
@延齿2573：GADPH是什么 -
万奚17779442407…… GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
@延齿2573：PCR时小鼠GAPDH扩出条带而目的基因却扩不出是什么原因? -
万奚17779442407…… 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.一个解释,目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.
@延齿2573：PCR时小鼠GAPDH扩出条带而目的基因却扩不出是什么原因?而且不同的cDNA同时扩相同目的基因,一个扩出来一个没有扩出来,但没扩出来的那个... - 作业帮
万奚17779442407…… [答案] 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.
@延齿2573：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
万奚17779442407…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@延齿2573：看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 -
万奚17779442407…… 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.
@延齿2573：pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任... - 作业帮
万奚17779442407…… [答案] 首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marker基因,但是你现在g...
@延齿2573：这是我设计的罗非鱼GAPDH基因的引物,各位高手看看有没有什么问题啊?最近我跑RT - PCR老失败! -
万奚17779442407…… 做RT首先确定RNA没有问题,这是前提;然后你这对引物,即使是直接扩增DNA也比较困难,给你俩建议,第一,尽量把突变的碱基放在最5端的位置,你的下游引物突变点有点靠近中间了,不是特别好;第二,把你的引物加长一些或者是设置在GC含量相对高一点的位置以使其退火温度高于60度,这样只要你的RNA没有问题就一定做得出来.你要想用现在的这对引物可以,建议你换好的酶,不然不好做.PP并不是设计引物好的软件,但不知道为什么国内都用它,其实它很业余.
@延齿2573：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
万奚17779442407…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@延齿2573：为什么chip结果用gapdh 验证 -
万奚17779442407…… 不论是用普通或者实时PCR,半定量时只能才同一个基因内比.GAPDH的DNA可以通过任何东西带下来,我个人认为主要是bead带下来的.
万奚17779442407…… GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
@延齿2573：PCR时小鼠GAPDH扩出条带而目的基因却扩不出是什么原因? -
万奚17779442407…… 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.一个解释,目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.
@延齿2573：PCR时小鼠GAPDH扩出条带而目的基因却扩不出是什么原因?而且不同的cDNA同时扩相同目的基因,一个扩出来一个没有扩出来,但没扩出来的那个... - 作业帮
万奚17779442407…… [答案] 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.
@延齿2573：我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 -
万奚17779442407…… 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上 另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
@延齿2573：看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 -
万奚17779442407…… 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.
@延齿2573：pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任... - 作业帮
万奚17779442407…… [答案] 首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marker基因,但是你现在g...
@延齿2573：这是我设计的罗非鱼GAPDH基因的引物,各位高手看看有没有什么问题啊?最近我跑RT - PCR老失败! -
万奚17779442407…… 做RT首先确定RNA没有问题,这是前提;然后你这对引物,即使是直接扩增DNA也比较困难,给你俩建议,第一,尽量把突变的碱基放在最5端的位置,你的下游引物突变点有点靠近中间了,不是特别好;第二,把你的引物加长一些或者是设置在GC含量相对高一点的位置以使其退火温度高于60度,这样只要你的RNA没有问题就一定做得出来.你要想用现在的这对引物可以,建议你换好的酶,不然不好做.PP并不是设计引物好的软件,但不知道为什么国内都用它,其实它很业余.
@延齿2573：做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? -
万奚17779442407…… 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
@延齿2573：为什么chip结果用gapdh 验证 -
万奚17779442407…… 不论是用普通或者实时PCR,半定量时只能才同一个基因内比.GAPDH的DNA可以通过任何东西带下来,我个人认为主要是bead带下来的.
