rna取样过程中多久降解
@广洁903：取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 -
冯奖13537298134…… 取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 细胞在离体后数分钟后开始死亡,注意是开始死亡,其实还有好多细胞存活,RNA在体内就处于不断降解的过程中,离体后速度逐渐加快,所以速冻越快越好,但是也不用过于紧张,即使放上半小时里面还有完整RNA存在,只是比例很低了,如果用于做NORTHERN肯定不行,但如果做一些不是表达效率很低的基因的RT的话还有机会的(经验之谈). 至于DEPC洗的问题,由于上述原因,只要操作迅速,其实剪子之类意义不大,毕竟细胞释放的酶应该比剪子上带的多多了,当然,洗洗也没坏处,更保险
@广洁903：我提取DNA后发现RNA过多,就加入了RNA酶,不到一星期我的DNA有严重的降解现象,会是RNA酶的原因吗 -
冯奖13537298134…… 去RNA的过程当中就有很大可能会降解DNA 这与加入RNA酶的量也是有关系的 一般情况下提出质粒后可以37度水浴半个小时 大部分RNA就会被自动降解掉了 另外附送 所有DNA接触的环境体系 必须是偏碱性的,因为DNA易被酸水解. 仅供参考 谢谢
@广洁903：我想采集提rna的样品,在解剖后可以用冰冷冻一段时间再采样吗, -
冯奖13537298134…… 根据我的经验,其实RNA也没有传说中的那么容易降解,组织中RNA含量很高,即使降解也降解不了多少,就可以直接放在4度冰箱,你也可以做个实验对比看看4度存放与液氮存放所提取的RNA差距有多大.并不建议放在-20度,这个存放时间最好不要超过一个星期.如果你实在担心RNA降解,那就放在液氮中.
@广洁903：提取RNA过程中为什么要严格控制时间、温度、PH? -
冯奖13537298134…… RNA易降解.时间短,温度低.就是防止RNA被RNase降解了.PH的话,提取RNA和DNA的ph是不一样的,控制ph可以控制RNA的提取的浓度以及纯度.
@广洁903：如何去除DNA中的RNA? -
冯奖13537298134…… 1.DNA样品中加适量RNA酶(0.1~0.3ul) 37 ℃水浴保温30min. 2.DNA样品放一段时间,RNA自动降解因为RNA没有比DNA稳定. 3.DNA溶于酚但是RNA不溶. 你看看情况那个方法比较好. 如果不去除RNA酶对于DNA不会有什么影响.
@广洁903：在RNA提取过程中需要注意哪些方面以防止RNA的降解啊? -
冯奖13537298134…… 最好用液氮,价钱也不贵,而且研钵等也不用处理,因为液氮温度太低了,磨样时RNase根本不起作用,待加入Trizon后,也更不怕RNase了.
@广洁903：提取组织RNA时,如何减少RNA的降解!
冯奖13537298134…… 1:所有用到的枪头、离心管都要在0.1%的DEPC水里浸泡过夜够,灭菌烘干使用.当然这些耗材都有现成商业化的买. 2:所有实验中用到水的地方都是0.1%的DEPC水(灭菌失活). 3:液氮研磨,裂解时间不宜太长,需要纯化的,粗提出的RNA尽快纯化,不要放太长时间. 4:去NDA时,DNA酶处理的时间要短,不超过30分钟. 5:尽量在低温的条件下操作.戴口罩,在冰上操作时注意不要有水碰到管口.自来水,人说话时的口气,唾沫都会污染RNA.
@广洁903：关于mRNA半衰期 -
冯奖13537298134…… 原核mRNA不进行加工,转录和翻译偶联同时进行.真核生物mRNA初级转录物要经过剪接外显子、戴帽、多聚腺苷酸化等加工过程.帽子的功能使mRNA免遭核酸酶的破坏能使mRNA与核糖体小亚基结合,开始合成蛋白...
@广洁903：如何去除DNA样品中的RNA -
冯奖13537298134…… 如何去除DNA样品中的RNA 1.DNA样品中加适量RNA酶(0.0.3ul) 37 ℃水浴保温30min. 2.DNA样品放一段时间,RNA自动降解因为RNA没有比DNA稳定. 3.DNA溶于酚但是RNA不溶.
@广洁903：NP - 40会破坏RNA吗 -
冯奖13537298134…… 不会.参考资料:RNA提取原理:通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,最后溶解.但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前...
冯奖13537298134…… 取出的标本放在冰上2小时rna会降解吗 细胞在离体后数分钟后开始死亡,注意是开始死亡,其实还有好多细胞存活,RNA在体内就处于不断降解的过程中,离体后速度逐渐加快,所以速冻越快越好,但是也不用过于紧张,即使放上半小时里面还有完整RNA存在,只是比例很低了,如果用于做NORTHERN肯定不行,但如果做一些不是表达效率很低的基因的RT的话还有机会的(经验之谈). 至于DEPC洗的问题,由于上述原因,只要操作迅速,其实剪子之类意义不大,毕竟细胞释放的酶应该比剪子上带的多多了,当然,洗洗也没坏处,更保险
@广洁903：我提取DNA后发现RNA过多,就加入了RNA酶,不到一星期我的DNA有严重的降解现象,会是RNA酶的原因吗 -
冯奖13537298134…… 去RNA的过程当中就有很大可能会降解DNA 这与加入RNA酶的量也是有关系的 一般情况下提出质粒后可以37度水浴半个小时 大部分RNA就会被自动降解掉了 另外附送 所有DNA接触的环境体系 必须是偏碱性的,因为DNA易被酸水解. 仅供参考 谢谢
@广洁903：我想采集提rna的样品,在解剖后可以用冰冷冻一段时间再采样吗, -
冯奖13537298134…… 根据我的经验,其实RNA也没有传说中的那么容易降解,组织中RNA含量很高,即使降解也降解不了多少,就可以直接放在4度冰箱,你也可以做个实验对比看看4度存放与液氮存放所提取的RNA差距有多大.并不建议放在-20度,这个存放时间最好不要超过一个星期.如果你实在担心RNA降解,那就放在液氮中.
@广洁903：提取RNA过程中为什么要严格控制时间、温度、PH? -
冯奖13537298134…… RNA易降解.时间短,温度低.就是防止RNA被RNase降解了.PH的话,提取RNA和DNA的ph是不一样的,控制ph可以控制RNA的提取的浓度以及纯度.
@广洁903：如何去除DNA中的RNA? -
冯奖13537298134…… 1.DNA样品中加适量RNA酶(0.1~0.3ul) 37 ℃水浴保温30min. 2.DNA样品放一段时间,RNA自动降解因为RNA没有比DNA稳定. 3.DNA溶于酚但是RNA不溶. 你看看情况那个方法比较好. 如果不去除RNA酶对于DNA不会有什么影响.
@广洁903：在RNA提取过程中需要注意哪些方面以防止RNA的降解啊? -
冯奖13537298134…… 最好用液氮,价钱也不贵,而且研钵等也不用处理,因为液氮温度太低了,磨样时RNase根本不起作用,待加入Trizon后,也更不怕RNase了.
@广洁903：提取组织RNA时,如何减少RNA的降解!
冯奖13537298134…… 1:所有用到的枪头、离心管都要在0.1%的DEPC水里浸泡过夜够,灭菌烘干使用.当然这些耗材都有现成商业化的买. 2:所有实验中用到水的地方都是0.1%的DEPC水(灭菌失活). 3:液氮研磨,裂解时间不宜太长,需要纯化的,粗提出的RNA尽快纯化,不要放太长时间. 4:去NDA时,DNA酶处理的时间要短,不超过30分钟. 5:尽量在低温的条件下操作.戴口罩,在冰上操作时注意不要有水碰到管口.自来水,人说话时的口气,唾沫都会污染RNA.
@广洁903：关于mRNA半衰期 -
冯奖13537298134…… 原核mRNA不进行加工,转录和翻译偶联同时进行.真核生物mRNA初级转录物要经过剪接外显子、戴帽、多聚腺苷酸化等加工过程.帽子的功能使mRNA免遭核酸酶的破坏能使mRNA与核糖体小亚基结合,开始合成蛋白...
@广洁903：如何去除DNA样品中的RNA -
冯奖13537298134…… 如何去除DNA样品中的RNA 1.DNA样品中加适量RNA酶(0.0.3ul) 37 ℃水浴保温30min. 2.DNA样品放一段时间,RNA自动降解因为RNA没有比DNA稳定. 3.DNA溶于酚但是RNA不溶.
@广洁903：NP - 40会破坏RNA吗 -
冯奖13537298134…… 不会.参考资料:RNA提取原理:通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,最后溶解.但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前...
